TW202126635A - 二醯基甘油醯基轉移酶２ 抑制劑 - Google Patents

二醯基甘油醯基轉移酶２ 抑制劑 Download PDF

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Abstract

本文描述為式(I)之化合物
Figure 109133632-A0101-11-0001-1
其中，R1 、R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 、R8 及R9 如本文所定義；其作為二醯基甘油醯基轉移酶2(DGAT2)抑制劑之用途、包含此抑制劑之醫藥組成物以及此抑制劑治療，例如，NASH，之用途。

Description

二醯基甘油醯基轉移酶２抑制劑
本發明係關於新的醫藥化合物、包含化合物之醫藥組成物、及化合物抑制二醯基甘油醯基轉移酶2(DGAT2)之活性的用途。
二醯基甘油醯基轉移酶(DGAT)催化三酸甘油酯(TAG)合成的最終步驟，特別是，脂肪酸與二醯基甘油的酯化導致TAG的形成。在哺乳動物中，已特徵化兩種DGAT酶(DGAT1及DGAT2)。儘管這些酶催化相同的酶反應，但其各自的胺基酸序列不相關且其佔據不同的基因家族。DGAT2在肝臟和脂肪中高度表現，且與DGAT1不同，其對二酸甘油酯(DAG)表現出出色的基質特異性。囓齒動物中DGAT2基因的缺失會導致子宮內生長缺陷、嚴重脂血症、皮膚屏障功能受損、以及出生後早期死亡。顯然，抑制DGAT2會導致多種編碼涉及脂肪生成(lipogensis)的蛋白質(包括固醇調控元素結合蛋白質1c(SREBP1c)和硬脂醯基CoA去飽和酶1(SCD1))的基因表現下調控。同時，諸如肉鹼棕櫚醯基轉移酶1(CPT1)的基因表現增加證明氧化路徑的誘導。這些變化的最終結果是降低肝DAG和TAG脂質量，進而導致肝臟中胰島素反應性的改善。再者，DGAT2抑制抑制肝VLDL TAG分泌並導致循環膽固醇量降低。最後，血漿脂蛋白元B(APOB)量受到抑制，這可能是由於對新合成的APOB蛋白質脂化的TAG供應減少所致。DGAT2抑制對血糖控制和血漿膽固醇概況的有益功效建議此靶標對代謝性疾病的治療很有價值(Choi, C. S.等人，2007.J Biol Chem 282 : 22678-22688)。
此外，對DGAT2活性的抑制導致肝脂質累積減少的觀察建議此酶的抑制劑可能在治療非酒精性脂肪性肝炎(NASH)中有用，NASH是高度流行的肝臟疾病，其特徵在於肝臟中過量的脂肪沉積。
近年來，在文獻和專利申請案(WO2013150416、WO2013137628、US20150259323、WO2015077299、WO2016036633、WO2016036638、WO2016036636)中已經報導數種DGAT2的小分子抑制劑。最近，共同轉讓的PCT申請案PCT/IB2017/054862在2018年2月22日公開為WO2018/033832，揭露DGAT2的小分子抑制劑。
然而，仍然需要具有DGAT2抑制活性並且用於治療、預防或減輕本文所述病表現的醫藥劑。再者，仍然需要具有改善的藥物動力學性質(諸如：溶解度、清除率和半衰期)的DGAT2抑制劑。較長的人類半衰期可能是因為較低的清除率及/或增加的分配體積。
本申請案針對式(I)之化合物
Figure 02_image001
其中， R1 為H或氟； R2 、R3 、R4 及R5 各獨立地選自H、(C1 -C3 )烷基、(C1 -C3 )氟烷基、(C1 -C3 )羥基烷基、及-(C1 -C3 )烷基-(C1 -C2 )烷氧基；以及 R6 、R7 、R8 、及R9 各獨立地選自H、氟、羥基、(C1 -C3 )烷基、(C1 -C3 )氟烷基、(C1 -C3 )羥基烷基、(C1 -C2 )烷氧基、(C1 -C2 )氟烷氧基、及-(C1 -C3 )烷基-(C1 -C2 )烷氧基；以及 其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 、R8 、及R9 之0、一或二者非為H； 或其醫藥上可接受之鹽。
本發明亦針對治療脂肪肝、非酒精性脂肪肝疾病、非酒精性脂肪性肝炎、帶有肝纖維化之非酒精性脂肪性肝炎、帶有硬化之非酒精性脂肪性肝炎或帶有硬化及肝細胞癌之非酒精性脂肪性肝炎之方法，包括投予到需要此治療的哺乳動物，諸如：人類，治療有效量之式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽。
本發明亦針對治療心臟衰竭、充血性心臟衰竭、冠狀動脈心臟疾病、末梢血管疾病、腎血管性疾病、肺性高血壓、血管炎、急性冠狀動脈症候群及心血管風險調整之方法，包括投予到需要此治療的哺乳動物，諸如：人類，治療有效量之式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽。
本發明亦針對治療第I型糖尿病、第II型糖尿病、原發性第I型糖尿病(第Ib型)、潛伏型成人自體免疫糖尿病(LADA)、早發性第2型糖尿病(EOD)、年輕發病非典型糖尿病(YOAD)、年輕人成年型糖尿病(MODY)、營養不良相關性糖尿病、妊娠糖尿病、冠狀動脈心臟疾病、缺血型腦中風、血管成形術後再狹窄、末梢血管疾病、間歇性跛行、心肌梗塞、異常血脂症、飯後脂血症、葡萄糖失耐症(IGT)之病症、受損之空腹血漿血糖的病症、代謝性酸血症、酮病、關節炎、糖尿病視網膜病變、黃斑點退化、白內障、糖尿病腎病變、腎小球硬化、慢性腎衰竭、糖尿病性神經病變、代謝症候群、X症候群、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油脂血症、胰島素抗性、葡萄糖代謝不良、皮膚及結締組織病症、足潰瘍及潰瘍性結腸炎、內皮細胞功能失調及動脈順應性不良、高apo B脂蛋白血症、及楓糖尿症之方法，包括投予到需要此治療的哺乳動物，諸如：人類，治療有效量之式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽。
本發明亦針對治療肝細胞癌、腎臟腎透明細胞癌、頭頸部鱗狀細胞癌、大腸直腸腺癌、間皮瘤、胃腺癌、腎上腺皮質癌、腎臟乳突細胞癌、子宮頸與子宮內頸癌、膀胱泌尿上皮癌、或肺腺癌之方法，包含投予到需要此治療的哺乳動物，諸如：人類，治療有效量之式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽。
本發明亦針對自基線降低非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)活動性評分(NAS)的嚴重度至少一或二點之方法，包含測量人類基線NAS的步驟、投予至人類有效量之式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽、及測量人類之NAS。
本發明亦針對具有治療有效量之式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑、媒劑或稀釋劑之醫藥組成物。
本發明亦針對醫藥組合組成物，其包括：治療有效量之組成物，其具有： 第一化合物，該第一化合物為式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽； 第二化合物，該第二化合物為抗糖尿病劑；非酒精性脂肪性肝炎治療劑、非酒精性脂肪肝疾病治療劑或抗心臟衰竭治療劑以及 醫藥載劑、媒劑或稀釋劑。
應當理解，前述一般性描述和下述詳細描述都只是例示性和說明性，並不限制所主張的本發明。
參考下述本發明例示性具體實施例的詳細描述及其中包括的實施例，可以更容易地理解本發明。
應當理解，本發明不限於當然可以變化的特定合成方法。亦應理解，本文所使用的術語僅出於描述特定具體實施例的目的，而無意於進行限制。在本說明書和隨後的申請專利範圍中，將參考許多術語，這些術語應定義為具有下述意義：
如本說明書本文中所使用，「一(a)或(an)」可以意指一或多個。如在本文的申請專利範圍中所使用，當與單詞「包含」結合使用時，單詞「一(a)或(an)」可以意指一或多個。如本文所用，「另一」可以指至少一第二個或更多個。
術語「約」是指相對術語，表示標稱值的正或負10%的近似值，在一具體實施例中，它是指正或負5%，在另一具體實施例中是正或負2%。對於本揭露的領域，此近似值量是適當的，除非該值被特別聲明為要求更嚴格的範圍。
當在本文中使用時，「化合物」包括任何醫藥上可接受之衍生物或變體，包括構形異構物(例如，順式和反式異構體)和所有光學異構體(例如，鏡像異構物及非鏡像異構物)、外消旋、非鏡像異構物和此類異構體的其他混合物、以及溶劑合物、水合物、類質同形體、同質多形體、互變異構物、酯、鹽型態和前藥。措辭「前藥」是指為藥物前驅物的化合物，其在投予之後通過一種化學或生理過程在活體內釋放藥物(例如，帶向生理pH或通過酶作用將前藥轉化為所欲藥物型態)。
單獨或組合使用的術語「烷基」是指式CnH2n+1的非環飽和烴基，其可以是直鏈或支鏈。這種基團的例子包括但不限於，甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、二級丁基、異丁基和三級丁基。烷基和各種其他含烴部分的碳原子含量由前綴表示，該前綴指定該部分中的較低和較高的碳原子數，即，前綴Ci-Cj表示整數「i」至整數「j」個碳原子(包含)之部分。因此，例如，C1 -C3 烷基是指1至3個碳原子(包含)的烷基。
「氟烷基」意指被一、二或三個氟原子取代的本文所定義的烷基。例示性(C1 )氟烷基化合物包括氟甲基、二氟甲基和三氟甲基；例示性(C2 )氟烷基化合物包括1-氟乙基、2-氟乙基、1,1-二氟乙基、1,2-二氟乙基、1,1,1-三氟乙基、1,1,2-三氟乙基等。
「羥基烷基」意指被一個原子取代的本文所定義的烷基。例示性羥基烷基化合物包括：羥基甲基、1-羥基乙基、2-羥基乙基等。
「烷氧基」意指通過氧基鍵結的直鏈飽和烷基或支鏈飽和烷基。此類烷氧基的例子(假設指定的長度涵蓋特定例子)是甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、三級丁氧基、戊氧基、異戊氧基、新戊氧基、三級戊氧基、己氧基、異己氧基、 庚氧基和辛氧基。
「氟烷氧基」意指被一個、兩個或三個氟原子取代的本文所定義的烷氧基。例示性(C1 )氟烷氧基化合物包括氟甲氧基、二氟甲氧基和三氟甲氧基；例示性的(C2 )氟烷基化合物包括1-氟乙氧基、2-氟乙氧基、1,1-二氟乙氧基、1,2-二氟乙氧基、1,1,1-三氟乙氧基、1,1,2-三氟乙氧基等。
「患者」意指溫血動物，諸如：天竺鼠、小鼠、大鼠、沙鼠、貓、兔子、狗、牛、山羊、綿羊、馬、猴子、黑猩猩及人類。
術語「醫藥上可接受」意指適於向患者投予的物質(例如，本發明化合物)及其任何鹽、或包含本發明的物質或鹽的組成物。
如本文所用，措辭「反應惰性溶劑」和「惰性溶劑」意指不以不利地影響所欲產品的產率的方式與起始材料、試劑、中間物或產品交互作用的溶劑或其混合物。
如本文所用，術語「選擇性(selectivity)或(selective)」係指與第二檢定中相同化合物的功效相比，第一檢定中化合物的功效更大。例如，在「腸選擇性」化合物中，第一檢定用於腸道中化合物的半衰期，而第二檢定用於肝臟中化合物的半衰期。
「治療有效量」意指(i)治療或預防特定疾病、病症或失調，(ii)減弱、改善或消除特定疾病、病症或失調的一或多種症狀，或(iii)預防或延遲本文所述特定疾病、病症或失調的一或多種症狀的發作的本發明化合物的量。
本文所用的術語「治療(treating)、(treat)或(treatment)」包括預防性(preventative)，即預防性(prophylactic)和舒緩性治療，即，緩和、減輕或減緩患者疾病(或病症)或任何與疾病有關的組織損傷的進展。
本申請案進一步針對式(II)之化合物
Figure 02_image003
其中： R1 為H或氟； R2 、R3 、R4 及R5 各獨立地選自H、(C1 -C3 )烷基、(C1 -C3 )氟烷基、(C1 -C3 )羥基烷基、及-(C1 -C3 )烷基-(C1 -C2 )烷氧基； R6 、R7 、R8 、及R9 各獨立地選自H、氟、羥基、(C1 -C3 )烷基、(C1 -C3 )氟烷基、(C1 -C3 )羥基烷基、(C1 -C2 )烷氧基、(C1 -C2 )氟烷氧基、及-(C1 -C3 )烷基-(C1 -C2 )烷氧基；以及 R10 、R11 、R12 、R13 及R14 各獨立地選自H及 氘；以及 其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 、R8 、及R9 之0、一或二者非為H； 或其醫藥上可接受之鹽。
本發明之一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物，其中，R2 、R3 、R4 及R5 各獨立地選自H及(C1 )氟烷基及R6 、R7 、R8 、及R9 各獨立地選自H、(C1 )氟烷基、及氟；其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 、R8 、及R9 之0、一或二者非為H；或其醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物，其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、及R7 為H；及R8 及R9 獨立地選自H、(C1 )氟烷基及氟；其中，R8 、及R9 之至少一者為(C1 )氟烷基或氟；或其醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物，其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R8 、及R9 為H；及R6 及R7 各獨立地選自H、(C1 )氟烷基及氟，其中，R6 及R7 之至少一者為(C1 )氟烷基或氟；或其醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物，其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、及R9 為H；及R7 及R8 各獨立地選自H、(C1 )氟烷基及氟，其中，R7 及R8 之至少一者為(C1 )氟烷基或氟；或其醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物，其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R8 及R9 為H；及R7 為(C1 )氟烷基或氟；或其醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物，其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R8 及R9 為H；及R7 為氟；或其醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一具體實施例包括選自下列的化合物 2-(5-((3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3R ,4S )-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺； 2-(5-((3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺； 2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3R ,4S )-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺； 2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3R ,4R )-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺； 2-(5-((3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3R ,4R )-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺；以及 2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺； 或其醫藥上可接受之鹽。
另一具體實施例包括具有下述結構的化合物：
Figure 02_image005
或其醫藥上可接受之鹽及包括該化合物之晶體或其醫藥上可接受之鹽。
在另一具體實施例中，化合物為2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -(5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺。
每個實施例或其醫藥上可接受之鹽可以單獨主張或以任何組合與任何數量的本文所描述的各與每個具體實施例組合在一起。
本發明之另一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽用作為藥劑之用途，特別是其中，該藥劑係用於治療脂肪肝、非酒精性脂肪肝疾病、非酒精性脂肪性肝炎、帶有肝纖維化之非酒精性脂肪性肝炎、帶有硬化之非酒精性脂肪性肝炎或帶有硬化及肝細胞癌之非酒精性脂肪性肝炎，包括以治療有效量投予到需要此治療的哺乳動物，諸如：人類。
本發明之另一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽用於製造治療脂肪肝、非酒精性脂肪肝疾病、非酒精性脂肪性肝炎、帶有肝纖維化之非酒精性脂肪性肝炎、帶有硬化之非酒精性脂肪性肝炎或帶有硬化及肝細胞癌之非酒精性脂肪性肝炎之藥劑之用途，包括以治療有效量投予到需要此治療的哺乳動物，諸如：人類。
本發明之另一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽用作為藥劑之用途，特別是其中，該藥劑係用於治療心臟衰竭、充血性心臟衰竭、冠狀動脈心臟疾病、末梢血管疾病、腎血管性疾病、肺性高血壓、血管炎、急性冠狀動脈症候群及心血管風險調整，包括投予到需要此治療的哺乳動物，諸如：人類，治療有效量之式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽用於製造治療心臟衰竭、充血性心臟衰竭、冠狀動脈心臟疾病、末梢血管疾病、腎血管性疾病、肺性高血壓、血管炎、急性冠狀動脈症候群及心血管風險調整之藥劑之用途，包括投予到需要此治療的哺乳動物，諸如：人類，治療有效量之式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽用作為藥劑之用途，特別是其中，該藥劑係用於治療第I型糖尿病、第II型糖尿病、原發性第I型糖尿病(第Ib型)、潛伏型成人自體免疫糖尿病(LADA)、早發性第2型糖尿病(EOD)、年輕發病非典型糖尿病(YOAD)、年輕人成年型糖尿病(MODY)、營養不良相關性糖尿病、妊娠糖尿病、冠狀動脈心臟疾病、缺血型腦中風、血管成形術後再狹窄、末梢血管疾病、間歇性跛行、心肌梗塞、異常血脂症、飯後脂血症、葡萄糖失耐症(IGT)之病症、受損之空腹血漿血糖的病症、代謝性酸血症、酮病、關節炎、糖尿病視網膜病變、黃斑點退化、白內障、糖尿病腎病變、腎小球硬化、慢性腎衰竭、糖尿病性神經病變、代謝症候群、X症候群、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油脂血症、胰島素抗性、葡萄糖代謝不良、皮膚及結締組織病症、足潰瘍及潰瘍性結腸炎、內皮細胞功能失調及動脈順應性不良、高apo B脂蛋白血症、及楓糖尿症，包括投予到需要此治療的哺乳動物，諸如：人類，治療有效量之式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽用於製造治療第I型糖尿病、第II型糖尿病、原發性第I型糖尿病(第Ib型)、潛伏型成人自體免疫糖尿病(LADA)、早發性第2型糖尿病(EOD)、年輕發病非典型糖尿病(YOAD)、年輕人成年型糖尿病(MODY)、營養不良相關性糖尿病、妊娠糖尿病、冠狀動脈心臟疾病、缺血型腦中風、血管成形術後再狹窄、末梢血管疾病、間歇性跛行、心肌梗塞、異常血脂症、飯後脂血症、葡萄糖失耐症(IGT)之病症、受損之空腹血漿血糖的病症、代謝性酸血症、酮病、關節炎、糖尿病視網膜病變、黃斑點退化、白內障、糖尿病腎病變、腎小球硬化、慢性腎衰竭、糖尿病性神經病變、代謝症候群、X症候群、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油脂血症、胰島素抗性、葡萄糖代謝不良、皮膚及結締組織病症、足潰瘍及潰瘍性結腸炎、內皮細胞功能失調及動脈順應性不良、高apo B脂蛋白血症、及楓糖尿症之藥劑之用途，包括投予到需要此治療的哺乳動物，諸如：人類，治療有效量之式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽用作為藥劑之用途，特別是其中，該藥劑係用於治療肝細胞癌、腎臟腎透明細胞癌、頭頸部鱗狀細胞癌、大腸直腸腺癌、間皮瘤、胃腺癌、腎上腺皮質癌、腎臟乳突細胞癌、子宮頸與子宮內頸癌、膀胱泌尿上皮癌、或肺腺癌，包含投予到哺乳動物，諸如：人類，需要此治療的治療有效量之式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一具體實施例包括式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽用於製造治療肝細胞癌、腎臟腎透明細胞癌、頭頸部鱗狀細胞癌、大腸直腸腺癌、間皮瘤、胃腺癌、腎上腺皮質癌、腎臟乳突細胞癌、子宮頸與子宮內頸癌、膀胱泌尿上皮癌、或肺腺癌之藥劑之用途，包含投予到哺乳動物，諸如：人類，需要此治療的治療有效量之式(I)或(II)之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽。
本發明的化合物可以包含不對稱或掌性中心，因此以不同的立體異構型態存在。除非另有說明，否則意為本發明化合物的所有立體異構型態及其混合物，包括外消旋混合物，均形成本發明的一部分。此外，本發明涵蓋所有幾何和位置異構物。例如，如果本發明的化合物併入雙鍵或稠合環，則順式和反式以及混合物均涵蓋在本發明的範圍內。
本發明的掌性化合物(及其掌性前驅物)可以使用層析法，典型是高壓液相層析法(HPLC)或超臨界流體層析法(SFC)，在具有不對稱固定相及由烴(包含0至50%的異丙醇(典型是2至20%)和0至5%的烷基胺(典型是0.1%二乙基胺)(DEA)或異丙基胺)所組成之移動相(典型是庚烷或己烷)的樹脂上，以鏡像異構物富集的型態獲得。洗提液濃縮提供富集的混合物。在使用SFC的情況下，移動相可能由超臨界流體(典型是二氧化碳)所組成，其中包含2至50%的醇，例如甲醇、乙醇或異丙醇。
藉由發明所屬技術領域中具有通常知識者已知的方法，諸如：藉由層析法及/或分餾結晶，基於其物理化學差異，可將非鏡像異構物混合物分離成其個別的非鏡像異構物。可以藉由與適當的光學活性化合物(例如，掌性助劑，諸如：掌性醇或莫氏酸氯化物(Mosher’s acid chloride))反應，將鏡像異構物混合物轉化成非鏡像異構物混合物，分離非鏡像異構物，且將個別非鏡像異構物轉化(例如水解)為相應的純鏡像異構物，以分離鏡像異構物。也可以藉由使用掌性HPLC管柱來分離鏡像異構物。或者，可以藉由使用光學活性起始材料，藉由使用光學活性試劑、基質、催化劑或溶劑的不對稱合成，或藉由不對稱轉變將一立體異構物轉化為另一種，來合成特定的立體異構物。
當本發明化合物具有二或更多個立體異構源中心，且名稱中給出絕對或相對立體化學時，R和S的命名依向上數字順序(1、2、3等)分別指各立體異構源中心(根據對各分子的習知IUPAC編號方案)。當本發明化合物具有一個或多個立體異構源中心並且名稱或結構未給出立體化學時，應理解該名稱或結構意於涵蓋所有型態的化合物，包括外消旋型態。
本發明化合物可以包含似烯烴的雙鍵。當存在此等鍵時，本發明的化合物以順式和反式組態及其混合物存在。術語「順式」是指兩個取代基相對於彼此和環的平面的定向(二者「上」或二者「下」)。類似地，術語「反式」是指兩個取代基相對於彼此和環平面的定向(取代基在環的相對側)。
本發明的中間物和化合物也可能以不同的互變異構型態存在，並且所有此等型態均涵蓋在本發明的範圍內。術語「互變異構物」或「互變異構型態」是指藉由低能量障壁可相互轉化的不同能量的結構異構物。例如，質子互變異構物(也稱為質子轉移互變異構物)包括經由質子遷移的相互轉化，諸如：酮-烯醇和亞胺-烯胺異構化。
價互變異構物包括藉由一些鍵結電子的重組而進行的相互轉化。
在本發明所主張之化合物的範圍內包括式(I)或(II)之化合物的所有立體異構物、幾何異構物和互變異構型態，包括呈現一種類型以上的異構性的化合物，以及其一或多種的混合物。亦包括酸加成鹽或鹼式鹽，其中相對離子是光學活性，例如D-乳酸或L-離胺酸，或外消旋，例如DL-酒石酸鹽或DL-精胺酸。
本發明包括所有醫藥上可接受之同位素標記的式(I)或(II)之化合物，其中，一或多個原子被具有相同原子序，但原子質量或質量數不同於通常在自然界中發現的原子質量或質量數的原子替換。
適於包含在本發明化合物中的同位素的例子包括氫的同位素，諸如：2 H及3 H，碳的同位素，諸如：11 C、13 C及14 C，氯的同位素，諸如：36 Cl，氟的同位素，諸如：18 F，碘的同位素，諸如：123 I、124 I及125 I，氮的同位素，諸如：13 N及15 N，氧的同位素，諸如：15 O、17 O及18 O，磷的同位素，諸如：32 P，及硫的同位素，諸如：35 S。
某些同位素標記的式(I)或(II)之化合物，例如併入放射性同位素的那些，有用於藥物及/或基質組織分佈研究。鑑於放射性同位素氚，即，3 H、及碳-14，即，14 C易於併入和現有的偵測手段，放射性同位素氚，即，3 H、及碳-14，即，14 C特別有用於此目的。
用更重的同位素諸如：氘，即，2 H取代，由於較大的代謝穩定性，例如，活體內半衰期增加或劑量需求降低，可以提供某些治療優勢，因此在某些情況下是較佳。
用正電子發射同位素(諸如：11 C、18 F、15 O及13 N)取代可有用於在正電子發射斷層掃描術(PET)研究中檢查基質受體佔有率。
同位素標記的式(I)或(II)之化合物一般可以藉由發明所屬技術領域中具有通常知識者已知的習知技術或使用合適的同位素標記試劑代替先前使用的非標記試劑藉由與所附實施例和製備中所述類似的方法來製備。
本發明的化合物本身，或可能時，可以其醫藥上可接受之鹽的型態被單離和使用。術語「鹽」是指本發明化合物的無機鹽和有機鹽。這些鹽可在化合物的最終單離和純化過程中原位製備，或藉由用合適的有機或無機酸分別處理化合物並單離由此形成的鹽來製備。
術語「醫藥上可接受之鹽」中所涵蓋的鹽是指本發明的化合物，其一般是藉由使游離鹼與合適的有機或無機酸反應以提供適合投予至患者的本發明化合物之鹽而製備。合適的酸加成鹽由形成無毒鹽的酸形成。例子包括乙酸鹽、己二酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、硼酸鹽、樟腦磺酸鹽(camsylate)、檸檬酸鹽、環己胺磺酸鹽、乙二磺酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽(gluceptate)、葡萄糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、六氟磷酸鹽、2-(4-羥基苯甲醯)苯甲酸鹽(hibenzate)、鹽酸鹽/氯化物、氫溴酸鹽/溴化物、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘二甲酸鹽(naphthylate)、2-萘磺酸鹽(2-napsylate)、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、乳清酸鹽(orotate)、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽(pamoate)、磷酸鹽/氫磷酸鹽/磷酸二氫鹽、焦穀胺酸鹽(pyroglutamate)、蔗糖酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸酯、三氟乙酸鹽和羥萘酸鹽(xinofoate)。見例如Berge, 等人，J. Pharm. Sci. 66, 1-19 (1977)；Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002)。
式(I)或(II)之化合物，及其醫藥上可接受之鹽可以非溶劑化型態和溶劑化型態存在。術語「溶劑合物」於本文用來描述分子錯合物，其包含式(I)或(II)之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、以及一或多種醫藥上可接受之溶劑分子，例如，乙醇。當溶劑為水時，使用術語「水合物」。
當前接受的有機水合物分類系統是定義單離位點、通道或金屬離子配位的水合物的系統-見Polymorphism in Pharmaceutical Solids by K. R. Morris (Ed. H. G. Brittain, Marcel Dekker, 1995)。單離位點水合物是其中藉由介入有機分子而使水分子彼此之間自直接接觸單離的水合物。在通道水合物中，水分子位於晶格通道中，其中其與其他水分子相鄰。在金屬離子配位的水合物中，水分子與金屬離子鍵結。
當溶劑或水緊密結合時，錯合物可具有與濕度無關的明確的化學計量。然而，當溶劑或水的結合力較弱時(如在通道溶劑合物和吸濕性化合物中)，則水/溶劑含量可能取決於濕度和乾燥條件。在這種情況下，非化學計量將是常態。
亦包括在本發明範圍內的為多組分錯合物(除鹽和溶劑合物以外)，其中藥物和至少一種其他組分以化學計量或非化學計量的量存在。這種類型的錯合物包括晶籠化合物(藥物-宿主包容錯合物)和共晶體。後者典型定義為中性分子成分的結晶錯合物，其通過非共價交互作用而結合在一起，但也可能是中性分子與鹽的錯合物。共晶體可藉由熔融結晶化、從溶劑中再結晶、或藉由一起物理研磨組分來製備-見Chem Commun, 17, 1889-1896, by O. Almarsson and M. J. Zaworotko (2004)。對於多組分錯合物的一般綜述，見J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288, by Haleblian (August 1975)。
本發明化合物包括上文定義的式(I)或(II)之化合物、同質多形體及其下文定義的異構體(包括光學、幾何和互變異構體)及經同位素標記之式(I)或(II)之化合物。
發明化合物可以作為前藥投予。因此，某些本身可能具有少或無藥理活性的式(I)或(II)之化合物的衍生物，當投予到體內或體上時，可以轉化為具有所欲活性的式(I)或(II)之化合物，例如，藉由水解裂解。此類衍生物被稱為「前藥」。[有關使用前藥的更多資訊可在下述發現：‘Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ACS Symposium Series (T Higuchi and W Stella)及’Bioreversible Carriers in Drug Design’, Pergamon Press, 1987 (ed. E. B. Roche, American Pharmaceutical Association)。]
例如，前藥可以藉由發明所屬技術領域中具有通常知識者已知為例如在H. Bundgaard (Elsevier, 1985)之“Design of Prodrugs”所述的「前部分」的某些部分，替代式(I)或(II)之化合物中存在的適當官能性來生產。
此前藥的一些例子包括： (i) 其中式(I)或(II)之化合物包含醇官能性(-OH)、其醚，例如，用(C1 -C6 )烷醯基氧基甲基替換氫；或磷酸酯(PO3 H2 )或其醫藥上可接受之鹽；以及 (ii) 式(I)或(II)中存在的胺基官能性的醯胺或胺基甲酸酯，其中，胺基NH基團的氫分別被(C1 -C10 )烷醯基或(C1 -C10 )烷氧基羰基替換。
亦包括在本發明範圍的為式(I)或(II)之化合物的活性代謝物(包括前藥)，即，在藥物投予後在活體內形成的化合物，通常是藉由氧化或脫烷基化。根據本發明的代謝物的一些例子包括： (i) 其中式(I)或(II)之化合物包含甲基、其羥基甲基衍生物(-CH3 -＞ -CH2 OH)，以及 (ii) 其中式(I)或(II)之化合物包含烷氧基、其羥基衍生物(-OR -＞ -OH)。
某些本發明化合物可以以一種以上的晶體型態存在(一般稱為「同質多形體」)。可以藉由在各種條件下結晶來製備同質多形體，例如，使用不同的溶劑或不同的溶劑混合物進行再結晶；在不同的溫度下結晶；及/或各種冷卻模式，在結晶期間從極快冷卻到極慢冷卻。也可以藉由加熱或熔化本發明化合物，然後逐漸或快速冷卻來獲得同質多形體。同質多形體的存在可以藉由固體探針NMR光譜法、IR光譜法、微差掃描熱量法、粉末x射線繞射或此等其他技術測定。
一般來說，本發明化合物可以藉由包括與化學領域中已知類似的方法之方法來製造，特別是根據本文所包含的描述。提供某些製造本發明化合物的方法，作為本發明的進一步特徵，並藉由以下反應圖說明。其他過程可能會在實驗章節中進行描述。以下概述製備式(I)或(II)之化合物的具體合成圖。注意，四唑一般是高能量官能性，且在合成和處理包含四唑的分子時應格外小心。
作為初步說明，在製備式(I)或(II)化合物時，應注意，一些可用於製備本文所述化合物的製備方法可能需要保護遠端官能性(例如，一級胺、二級胺、(I)或(II)前驅物中的羧基)。這種保護的需求將根據遠端官能性的性質和製備方法的條件而有所不同。對於這種保護的需要是發明所屬技術領域中具有通常知識者輕易確定。這種保護/脫保護方法的使用也在本領域技術內。對於保護基及其使用的一般說明，見T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991。
例如，某些化合物包含一級胺或羧基官能性，如果不加保護，可能會干擾分子其他位點的反應。因此，可以藉由可以在隨後的步驟中除去的合適保護基團來保護此官能性。合適的用於胺和羧酸保護的保護基團包括共用於肽合成的保護基團(諸如：N -第三丁氧基羰基、苄基氧基羰基和9-茀基伸甲氧基羰基用於胺和低級烷基或苄基酯用於羧酸)，通常在所述反應條件下不具有化學反應性，且典型可以在不化學改變式(I)或(II)化合物其他官能性下除去。
本發明化合物可以藉由合成途徑合成，合成途徑包括與化學領域熟知的方法類似的方法，特別是根據本文所包含的描述。起始材料通常可從商業來源獲得，諸如：MilliporeSigma (Milwaukee, WI)或使用發明所屬技術技術中具有通常知識者熟知的方法輕易製備(例如，藉由Louis F. Fieser與Mary Fieser、Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, New York (1967-1999 ed.)、或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin，包括副刊(亦可通過Beilstein線上資料庫獲得)中一般描述的方法製備)。本文使用的許多化合物與有很大的科學興趣和商業需求的化合物有關，或衍生自該化合物，且因此許多此類化合物可商購獲得或在文獻中報導，或易於藉由文獻報導的方法從其他常用的物質製備。
在以下實施例章節中提供個別反應步驟的詳細描述。發明所屬技術領域中具有通常知識者將理解，可以使用其他合成路徑來合成化合物。儘管以下討論特定的起始材料和試劑，但是可以容易地取代其他起始材料和試劑以提供各種衍生物和/或反應條件。另外，根據此揭露，可以使用發明所屬技術領域中具有通常知識者熟知的習知化學進一步修飾藉由下述方法製備的許多化合物。 組合劑
本發明化合物可以單獨投予或與一種或多種額外治療劑組合投予。「組合投予」或「組合療法」是指將本發明化合物和一或多種額外治療劑同時投予於欲治療的哺乳動物。當組合投予時，各組分可以同時或以任何順序在不同的時間點依次投予。因此，可以分別但在時間上足夠緊密地分開投予各組分以提供所欲治療功效。片語「同時投予」、「共同投予」、「一齊投予」和「一齊地投予」是指將化合物組合投予。因此，本文所述的預防和治療方法包括使用組合劑。
組合劑以治療有效量投予至哺乳動物。「治療有效量」是指一定量的本發明化合物，當單獨投予或與額外治療劑組合投予至哺乳動物時，有效治療所欲的疾病/病症(例如，NASH、心臟衰竭或糖尿病)。
鑑於本發明化合物的NASH/NAFLD活性，可以將它們與其他治療非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及/或非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)及相關疾病/病症的劑共同投予，諸如：奧利司他(Orlistat)、TZD和其他胰島素敏化劑、FGF21類似物、二甲雙胍(metformin)、Omega-3-酸乙基酯(例如Lovaza)、纖維酸酯、HMG CoA-還原酶抑制劑、依澤替米貝(Ezetimibe)、普羅布考(Probucol)、熊去氧膽酸(Ursodeoxycholic acid)、TGR5促效劑、FXR促效劑、維生素E、甜菜鹼、己酮可可鹼(Pentoxifylline)、CB1拮抗劑、肉鹼、N -乙醯基半胱胺酸、還原型麩胺基硫、氯卡色林(lorcaserin)、那屈酮與苯丙胺(buproprion)的組合、SGLT2抑制劑(包括達格列淨(dapagliflozin)、卡納格列淨(canagliflozin)、恩格列淨(empagliflozin)、托格列淨(tofogliflozin)、埃格列淨(ertugliflozin)、ASP-1941、THR1474、TS-071、ISIS388626與LX4211以及WO2010023594中該些)、芬他命(Phentermine)、托吡酯(Topiramate)、GLP-1受體促效劑、GIP受體促效劑、雙重GLP-1受體/升糖素受體促效劑(例如OPK88003、MEDI0382、JNJ-64565111、NN9277、BI 456906)、雙重GLP-1受體/GIP受體促效劑(例如，提派肽(Tirzepatide) (LY3298176)、NN9423)、血管收縮素-受體阻斷劑、乙醯基-CoA羧酶(ACC)抑制劑、BCKDK抑制劑、己酮糖激酶(ketohexokinase)(KHK)抑制劑、ASK1抑制劑、支鏈α酮酸脫氫酶激酶抑制劑(BCKDK抑制劑)、CCR2及/或CCR5抑制劑、PNPLA3抑制劑、DGAT1抑制劑、FGF21類似物、FGF19類似物、PPAR促效劑、FXR促效劑、AMPK活化劑(例如ETC-1002(斑沛依克酸(bempedoic acid))、SCD1抑制劑或MPO抑制劑。
例示性的GLP-1受體促效劑包括利拉魯肽(liraglutide)，阿比魯肽(albiglutide)，艾塞那肽(exenatide)，阿比魯肽(albiglutide)，利西拉來(lixisenatide)，杜拉魯肽(dulaglutide)，司馬魯肽(semaglutide)，HM15211，LY3298176，Medi-0382，NN-9924，TTP-054，TTP-273，依普格列奈(efpeglenatide)、WO2018109607中所述之該些、2019年6月11日申請的PCT/IB2019/054867中所述之該些和2019年6月13日申請的PCT/IB2019/054961中所述之該些，包括下述： 2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-7-氟-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[(2S )-2-(4-氯-2-氟苯基)-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[(2S )-2-(4-氯-2-氟苯基)-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-7-氟-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(4-氰基-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-3-(1,3-㗁唑-2-基甲基)-3H -咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸； 2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(1-乙基-1H -咪唑并-5-基)甲基]-1H-苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-(1,3-㗁唑-4-基甲基)-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-(吡啶-3-基甲基)-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-(1,3-㗁唑-5-基甲基)-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(1-乙基-1H -1,2,3-三唑-5-基)甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-(1,3-㗁唑-2-基甲基)-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(4-氯-2-氟苯基)-7-氟-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(4-氰基-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-(1,3-㗁唑-2-基甲基)-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[(2S )-2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-7-氟-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[(2S )-2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[(2S )-2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-7-氟-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[(2S )-2-(4-氰基-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[(2S )-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[(2S )-2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(1-乙基-1H -咪唑并-5-基)甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[(2R )-2-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(1-乙基-1H -咪唑并-5-基)甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[(2S )-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[(2R )-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-({4-[2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基-1,3-苯并二㗁呃-4-基]哌啶-1-基}甲基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸，DIAST-X2； 2-[(4-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-[(4-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}哌啶-1-基)甲基]-1-(1,3-㗁唑-2-基甲基)-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-[(4-{2-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}哌啶-1-基)甲基]-1-(1,3-㗁唑-2-基甲基)-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-[(4-{2-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-3-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-[(4-{3-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]吡𠯤-2-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-(6-{6-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-2-基}-6-氮雜螺[2.5]辛-1-基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-(6-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]-5-氟嘧啶-4-基}-6-氮雜螺[2.5]辛-1-基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-(6-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]-5-氟嘧啶-4-基}-6-氮雜螺[2.5]辛-1-基)-1-(1,3-㗁唑-2-基甲基)-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-(6-{6-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]-5-氟吡啶-2-基}-6-氮雜螺[2.5]辛-1-基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-(6-{6-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]-3-氟吡啶-2-基}-6-氮雜螺[2.5]辛-1-基)-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-[(4-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]嘧啶-4-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-{[(2S )-4-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]-5-氟嘧啶-4-基}-2-甲基哌𠯤-1-基]甲基}-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸； 2-{[(2S )-4-{2-[(4-氯-2-氟苄基)氧基]嘧啶-4-基}-2-甲基哌𠯤-1-基]甲基}-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸；以及 2-[(4-{6-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-2-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸，及其醫藥上可接受之鹽。
例示性ACC抑制劑包括4-(4-[(1-異丙基-7-側氧基-1,4,6,7-四氫-1’H-螺[吲唑-5,4’-哌啶]-1’-基)羰基]-6-甲氧基吡啶-2-基)苯甲酸、吉卡賓(gemcabene)、及菲可司他(firsocostat) (GS-0976)及其醫藥上可接受之鹽。
例示性FXR促效劑包括托品費索(tropifexor) (2-[(1R,3R,5S)-3-({5-環丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-㗁唑-4-基}甲氧基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-羧酸)、希羅費索(cilofexor) (GS-9674)、奧貝膽酸(obeticholic acid)、LY2562175、Met409、TERN-101及EDP-305及其醫藥上可接受之鹽。
例示性KHK抑制劑包括[(1R,5S,6R)-3-{2-[(2S)-2-甲基吖呾-1-基]-6-(三氟甲基)嘧啶-4-基}-3-氮雜雙環[3.1.0]己-6-基]乙酸及其醫藥上可接受之鹽。
例示性BCKDK抑制劑包括2019年6月28日申請的美國序號62/868,057及2019年6月28日申請的美國序號62/868,542中所述的該些，包括下述： 5-(5-氯-4-氟3-甲基噻吩-2-基)-1H -四唑； 5-(5-氯-3-二氟甲基噻吩-2-基)-1H -四唑； 5-(5-氟-3-甲基噻吩-2-基)-1H -四唑； 5-(5-氯-3-甲基噻吩-2-基)-1H -四唑； 5-(3,5-二氯噻吩-2-基)-1H -四唑； 5-(4-溴-3-甲基噻吩-2-基)-1H -四唑； 5-(4-溴-3-乙基噻吩-2-基)-1H -四唑； 5-(4-氯-3-乙基噻吩-2-基)-1H -四唑； 3-氯-5-氟噻吩并[3,2-b]噻吩-2-羧酸； 3-溴-5-氟噻吩并[3,2- b]噻吩-2-羧酸； 3-(二氟甲基)-5-氟噻吩并[3,2-b]噻吩-2-羧酸； 5,6-二氟噻吩并[3,2-b]噻吩-2-羧酸；以及 3,5-二氟噻吩并[3,2-b]噻吩-2-羧酸； 或其醫藥上可接受之鹽。
鑑於本發明化合物的抗糖尿病活性，它們可以與其他抗糖尿病劑共同投予。合適的抗糖尿病劑包括胰島素、二甲雙胍(metformin)、GLP-1受體促效劑 (上述本文所述)、乙醯基-CoA羧酶(ACC)抑制劑 (上述本文所述)、SGLT2抑制劑(上述本文所述)、單醯基甘油酯O-醯基轉移酶抑制劑、磷酸二酯酶(PDE)-10抑制劑、AMPK活化劑 (例如，ETC-1002 (斑沛依克酸(bempedoic acid)))、磺醯基脲(例如，乙醯苯磺醯環己脲、氯苯磺丙脲、特泌胰(diabinese)、格列本脲(glibenclamide)、格列吡嗪(glipizide)、格列本脲(glyburide)、格列美脲(glimepiride)、格列齊特(gliclazide)、格列戊脲(glipentide)、格列喹酮(gliquidone)、格列索脲(glisolamide)、妥拉磺脲(tolazamide)、及甲苯磺丁脲(tolbutamide))、美格替耐(meglitinide)、α-澱粉酶抑制劑(例如，澱粉酶抑肽(tendamistat)、萃他丁(trestatin)及AL-3688)、α-葡萄糖苷水解酶抑制劑(例如，阿卡波糖(acarbose))、α-葡萄糖苷酶抑制劑(例如，脂解素(adiposine)、卡格列波糖(camiglibose)、乙格列酯(emiglitate)、米格列醇(miglitol)、伏格列波糖(voglibose)、帕地黴素-Q(pradimicin-Q)、及沙司他丁(salbostatin))、PPARγ 促效劑 (例如，巴拉格列酮(balaglitazone)、環格列酮(ciglitazone)、達格列酮(darglitazone)、恩格列酮(englitazone)、伊格列酮(isaglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)和羅格列酮(rosiglitazone))、PPARα/γ促效劑(例如，CLX-0940、GW-1536、GW-1929、GW-2433、KRP-297、L-796449、LR-90、MK-0767及SB-219994)、蛋白質酪胺酸磷酸酶-1B (PTP-1B)抑制劑(例如，特羅杜明(trodusquemine)、西替歐醛萃取物(hyrtiosal extract)、及Zhang, S.等人所揭示的化合物Drug Discovery Today，12(9/10)，373-381 (2007))、SIRT-1活化劑(例如，白藜蘆醇(resveratrol)、GSK2245840或GSK184072)、二肽基肽酶IV (DPP-IV)抑制劑(例如，WO2005116014中該些、西他列汀(sitagliptin)、維格列汀(vildagliptin)、阿格列汀(alogliptin)、度格列汀(dutogliptin)、利拉利汀(linagliptin)、及沙格列汀(saxagliptin))、胰島素促泌素(secreatagogues)、脂肪酸氧化抑制劑、A2拮抗劑、c-jun胺基-終端激酶(JNK) 抑制劑、葡萄糖激酶活化劑 (GKa)，諸如：WO2010103437、WO2010103438、WO2010013161、WO2007122482中所述之該些、TTP-399、TTP-355、TTP-547、AZD1656、ARRY403、MK-0599、TAK-329、AZD5658或GKM-001、胰島素、胰島素擬似物、肝醣磷酸化酶抑制劑(例如，GSK1362885)、VPAC2受體促效劑、升糖素受體調節劑，諸如：Demong, D.E. 等人，Annual Reports in Medicinal Chemistry 2008、43、119-137中所述之該些、GPR119調節劑，特別是促效劑，諸如：WO2010140092、WO2010128425、WO2010128414、WO2010106457、Jones, R.M.等人，在Medicinal Chemistry 2009，44，149-170中所述之該些(例如，MBX-2982、GSK1292263、APD597及PSN821)、FGF21衍生物或類似物，諸如：Kharitonenkov, A.等人，Current Opinion in Investigational Drugs 2009、10(4)359-364中所述之該些、TGR5 (also termed GPBAR1)受體調節劑，特別是促效劑，諸如：Zhong, M., Current Topics in Medicinal Chemistry，2010，10(4)、386-396中所述之該些及INT777，GPR40促效劑，諸如：Medina, J.C.，Annual Reports in Medicinal Chemistry，2008，43，75-85中所述之該些，包括，但不限於，TAK-875、GPR120調節劑，特別是促效劑，高親和性菸鹼酸受體 (HM74A)活化劑，及SGLT1抑制劑，諸如：GSK1614235。可與本發明化合物組合的抗糖尿病劑之進一步代表性清單可在例如WO2011005611之第28頁第35行至第30頁第19行發現。
其他抗糖尿病可包括肉鹼棕櫚醯基轉移酶酵素之抑制劑或調節劑、果糖1,6-二磷酸酯酶之抑制劑、醛醣還原酶之抑制劑、礦皮質素受體抑制劑、TORC2之抑制劑、CCR2及/或CCR5之抑制劑、PKC同功型(例如，PKCα、PKCβ、PKCγ)之抑制劑、脂肪酸合成酶之抑制劑、絲胺酸棕櫚醯基轉移酶之抑制劑、GPR81、GPR39、GPR43、GPR41、GPR105、Kv1.3之調節劑、視黃醇結合蛋白質4、糖皮質素受體、生長激素抑制素(somatostain)受體 (例如，SSTR1、SSTR2、SSTR3及SSTR5)、PDHK2或PDHK4之抑制劑或調節劑、MAP4K4之抑制劑、包括IL1β之IL1家族之調節劑、RXRα之調節劑。此外，適當抗糖尿病劑包括Carpino、P.A.、Goodwin、B. Expert Opin. Ther. Pat、2010、20(12)、1627-51所列機制。
本發明化合物可與抗心臟衰竭劑共同投予，諸如：ACE抑制劑(例如，卡託普利(captopril)、依那普利(enalapril)、福辛普利(fosinopril)、賴諾普利(lisinopril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、雷米普利(ramipril)、群多普利(trandolapril))、血管收縮素II受體阻斷劑(例如，坎地沙坦(candesartan)、氯沙坦(losartan)、纈沙坦(valsartan))、血管收縮素-受體腦啡肽酶(neprilysin)抑制劑(沙庫比曲(sacubitril)/纈沙坦(valsartan))、If 通道阻斷劑伊伐佈雷定(Ivabradine)、β-腎上腺素阻斷劑(例如，比索洛爾(bisoprolol)、琥珀酸美托洛爾(metoprolol)、卡維洛爾(carvedilol))、醛固酮拮抗劑(例如，安體舒通(spironolactone)、依普利酮(eplerenone))、聯胺肼及異山梨醇硝醇脂、利尿劑(例如，利尿磺胺(furosemide)、丁苯氧酸(bumetanide)、托西邁(torsemide)、氯噻嗪(chlorothiazide)、阿米洛利(amiloride)、氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、吲達帕胺(Indapamide)、美托拉宗(Metolazone)、三胺蝶素(Triamterene))、或狄戈辛(digoxin)。
本發明化合物亦可與膽固醇或脂質降低劑共同投予，包括下述例示性劑：HMG CoA還原酶抑制劑(例如，普伐他汀(pravastatin)、匹伐他汀(p itavastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、NK-104 (又名伊伐他汀(itavastatin)、或尼伐他汀(nisvastatin)或尼貝司他汀(nisbastatin))及ZD-4522 (又名羅素他汀(rosuvastatin)、或阿他伐他汀(atavastatin)或維沙他汀(visastatin)))；鯊烯合成酶抑制劑；纖維酸酯(例如，吉非羅齊(gemfibrozil)、佩瑪貝特(pemafibrate)、非諾貝特(fenofibrate)、氯貝特(clofibrate))；膽酸鉗合劑(諸如：降膽敏(questran)、考來替泊(colestipol)、考來維侖(colesevelam))；ACAT抑制劑；MTP抑制劑；脂肪加氧酶(lipooxygenase)抑制劑；膽固醇吸收抑制劑(例如，依澤替米貝(ezetimibe)；菸鹼酸劑(例如，菸鹼酸、尼克爾(niacor)、緩釋型-菸鹼酸)；omega-3脂肪酸(例如，依泮瓦(epanova)、魚油、二十碳五烯酸)；膽硬脂基酯轉移蛋白質抑制劑(例如，歐比塞曲匹(obicetrapib))及PCSK9調節劑(例如，阿利庫單抗(alirocumab)、依伏庫單抗(evolocumab)、巴可西珠單抗(bococizumab)、ALN-PCS (依夕蘭(inclisiran)))。
本發明化合物亦可與抗高血壓劑組合使用且此抗高血壓活性發明所屬技術領域中具有通常知識者很容易根據標準檢定(例如，血壓測量)來測定。合適的抗高血壓劑之例子包括：α-腎上腺素阻斷劑；β 腎上腺素阻斷劑；鈣通道阻斷劑(例如，地爾硫卓(diltiazem)、異搏定(verapamil)、硝苯地平(nifedipine)及氨氯地平(amlodipine))；血管舒張劑(例如，聯胺肼)、利尿劑(例如，氯噻嗪(chlorothiazide)、氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、氟甲噻嗪(flumethiazide)、氫氟甲噻嗪(hydroflumethiazide)、苄氟甲噻嗪(bendroflumethiazide)、甲基氯噻嗪(chlorothiazide)、三氯甲噻嗪(trichloromethiazide)、多噻嗪(polythiazide)、苄噻嗪(benzthiazide)、埃酒克林酸三庫來那芬(ethacrynic acid tricrynafen)、氯塞酮(chlorthalidone)、托西邁(torsemide)、利尿磺胺(furosemide)、姆索利胺(musolimine)、丁苯氧酸(bumetanide)、三胺蝶素(triamtrenene)、阿米洛利(amiloride)、安體舒通(spironolactone))；腎素抑制劑；ACE抑制劑(例如，卡託普利(captopril)、佐芬普利(zofenopril)、福辛普利(fosinopril)、依那普利(enalapril)、西那普利(ceranopril)、西拉普利(cilazopril)、地拉普利(delapril)、噴托普利(pentopril)、喹那普利(quinapril)、雷米普利(ramipril)、賴諾普利(lisinopril))；AT-1受體拮抗劑 (例如，氯沙坦(losartan)、依貝沙坦(irbesartan)、纈沙坦(valsartan))；ET 受體拮抗劑 (例如，西他生坦(sitaxsentan)、阿曲生坦(atrsentan)及美國專利案第5,612,359及6,043,265號中揭露之化合物)；雙向ET/AII抗拮劑(例如，WO 00/01389中揭露之化合物)；中性胜肽內切酶(NEP)抑制劑；血管胜肽酶(vasopepsidase)抑制劑(雙向NEP-ACE抑制劑) (例如，吉莫曲拉(gemopatrilat)和硝酸鹽)。例示性抗心絞痛劑為伊伐佈雷定(Ivabradine)。
合適的鈣通道阻斷劑(L-型或T-型)之例子包括地爾硫卓(diltiazem)、異搏定(verapamil)、硝苯地平(nifedipine)與氨氯地平(amlodipine)及米貝地爾(mybefradil)。
合適的之例子強心苷包括毛地黃(digitalis)和哇巴因(ouabain)。
在一具體實施例中，式(I)或(II)化合物可與共同投予一或多種利尿劑。合適的利尿劑之例子包括(a)亨氏環利尿劑，諸如：利尿磺胺(furosemide) (諸如：LASIX™)、托西邁(torsemide) (諸如：DEMADEX™)、貝美他尼(bemetanide) (諸如：BUMEX™)、及埃酒克林酸 (諸如：EDECRIN™)；(b) 噻嗪型利尿劑 諸如：氯噻嗪(chlorothiazide) (諸如：DIURIL™、ESIDRIX™或HYDRODIURIL™)、氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide) (諸如：MICROZIDE™或ORETIC™)、苄噻嗪(benzthiazide)、氫氟甲噻嗪(hydroflumethiazide) (諸如：SALURON™)、苄氟甲噻嗪(bendroflumethiazide)、甲基氯噻嗪(methychlorthiazide)、多噻嗪(polythiazide)、三氯甲噻嗪(trichlormethiazide)、及吲達帕胺(Indapamide) (諸如：LOZOL™)；(c) 苄甲內醯胺類(phthalimidine)型利尿劑，諸如：氯塞酮(chlorthalidone) (諸如：HYGROTON™)、及美托拉宗(Metolazone) (諸如：ZAROXOLYN™)；(d) 喹唑啉型利尿劑，諸如：喹乙唑酮(quinethazone)；以及(e) 保鉀(potassium- sparing)利尿劑，諸如：三胺蝶素(Triamterene) (諸如：DYRENIUM™)、及阿米洛利(amiloride) (諸如：MIDAMOR™或MODURETIC™)。
在另一具體實施例中，式(I)或(II)之化合物可與亨氏環利尿劑共同投予。在又另一具體實施例中，亨氏環利尿劑係選自利尿磺胺(furosemide)及托西邁(torsemide)。在又另一具體實施例中，一或多種式(I)或(II)之化合物可與利尿磺胺(furosemide)共同投予。在又另一具體實施例中，一或多種式(I)或(II)之化合物可與托西邁(torsemide) (其可視需要為托西邁(torsemide)之經控制或經修飾釋放型)共同投予。
在另一具體實施例中，式(I)或(II)之化合物可與噻嗪型利尿劑共同投予。在又另一具體實施例中，噻嗪型利尿劑係選自下列所組成之群組：氯噻嗪(chlorothiazide)及氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide)。在又另一具體實施例中，一或多種式(I)或(II)之化合物可與氯噻嗪(chlorothiazide)共同投予。在又另一具體實施例中，一或多種式(I)或(II)之化合物可與氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide)共同投予。
在另一具體實施例中，一或多種 式(I)或(II)之化合物可與苄甲內醯胺類(phthalimidine)型利尿劑共同投予。在又另一具體實施例中，苄甲內醯胺類(phthalimidine)型利尿劑為氯塞酮(chlorthalidone)。
合適的礦皮質素受體拮抗劑之例子包括螺內酯(sprionolactone)及依普利酮(eplerenone)。
合適的磷酸二酯酶抑制劑之例子包括：PDE III抑制劑(諸如：西羅塔唑(cilostazol))；以及PDE V抑制劑(諸如：西地那非(sildenafil))。
發明所屬技術領域中具有通常知識者應理解本發明化合物亦可與其他心血管或腦血管治療(包括PCI、支架術、藥物洗提支架、幹細胞療法)及醫療裝置(諸如植入節律器、電擊器或心臟再同步化治療)聯合使用。
特別是當以單一劑量單位提供時，在組合的活性成分之間存在化學交互作用的可能性。為此理由，當將式(I)或(II)化合物和第二種治療劑組合在單一個劑量單位中時，其受調配，使得儘管活性成分組合在單一劑量單位中，但活性成分之間的物理接觸被最小化(即，減少)。例如，一種活性成分可以經腸衣塗佈。藉由對活性成分之一腸衣塗佈，不僅可以使組合的活性成分之間的接觸最小化，而且可以控制這些成分之一在胃腸道中的釋放，從而使這些成分之一不是在胃中釋放，而是在腸中釋放。活性成分之一也可以用實現在整個胃腸道中的持續釋放，並且還用於使組合的活性成分之間的物理接觸最小化的材料塗佈。此外，持續釋放組分可以額外經腸衣塗佈，使得此組分的釋放僅在腸中發生。又另一方法仍將涉及組合產品的調配，其中一種組分用持續釋放及/或腸衣釋放聚合物塗佈，而另一種組分亦以聚合物塗佈，諸如：低黏度等級的羥基丙基甲基纖維素(HPMC)或本領域已知的其他合適的材料，以進一步分隔活性成分。聚合物塗層用於形成對與其他組分交互作用的額外屏障。
那些使本發明的組合產品的組分之間的接觸最小化的方法以及其他方法，無論是以單一劑型投予還是以分開的型態但同時以相同的方式投予，對於發明所屬技術領域中具有通常知識者來說一旦掌握本揭露，都是輕易顯而易見。
在組合療法治療中，藉由習知方法將本發明化合物和其他藥物療法都投予到哺乳動物(例如，人，雄性或雌性)。式(I)或(II)化合物及其鹽均適合作為抑制哺乳動物，特別是人類中的二醯基甘油醯基轉移酶2的劑治療使用，且因此有用於治療各種其中牽連此作用的病症(例如，本文所述的病症)。
根據本發明可治療的疾病/病症包括，但不限於，心血管病症、糖尿病(例如、第II型)和糖尿病並發症、血管病症、NASH(非酒精性脂肪性肝炎)、NAFLD (非酒精性肥胖肝疾病)和腎臟疾病。
咸信DGAT2抑制對血糖控制和血漿膽固醇概況均呈現有益功效，使得此靶標在代謝性疾病的治療中是有價值的(Choi, C. S.等人，2007.J Biol Chem 282 : 22678-22688)。鑑於對DGAT2的抑制與代謝性及相關疾病/病症之間的正向關聯性，式(I)或(II)化合物借助藥理作用有用於預防、阻止及/或逆行代謝和相關的疾病狀態(例如，第II型糖尿病；NASH；NAFLD)。
肝三酸甘油酯(TG)衍生自3個主要來源：重新脂質生成(DNL)、脂肪提供的脂肪酸(FA)的再酯化、和飲食攝入(Cohen J. C. 等人，2011,Science ,332 , 1519-1523)。儘管對肝TG池的最大貢獻似乎是源自脂肪細胞的解脂產品，但脂肪生成路徑在NAFLD的發展和進展為NASH扮演重要角色。藉由分析有和沒有NAFLD患者中TG的FA組成，支持DNL對在NAFLD中疾病進展的貢獻。數據證實，有NAFLD患者的飽和FA量增加，這暗示DNL路徑是肝脂肪變性的重要貢獻，因為飽和FA代表DNL的主要產品。這些發現與在NAFLD中VLDL粒子中DNL衍生的TG增加內含物一致，其中相較於在食用典型西方飲食的正常患者中只有2%到5%，15%的TG產生源自DNL (Sanders, F. W. B. and , Griffin J. L., 2016,Biol. Rev .,91 , 452-468)。另外，據報導肝DNL的升高率是NAFLD的獨特特徵。相對於正常肝脂肪的患者，肝脂肪升高的人類患者在肝DNL速率顯示超過3倍增加，但兩組之間在脂肪游離脂肪酸(FFA)通量或從FFA產生VLDL方面未偵測到差異。因此，當比較併入VLDL TG之FA的絕對來源時，肝DNL是高肝脂肪的患者中顯著升高的唯一來源(Lambert J. E.及Ramos-Roman, M. A., 2014,Gastroenterology ,146 , 726-735)。
二醯基甘油醯基轉移酶(DGAT)催化TG合成的最終步驟；具體而言，脂肪酸(FA)與二醯基甘油(DAG)的酯化導致TG形成(Yen, C. L. 等人，2008,J. Lipid Res .,49 , 2283-2301)。在哺乳動物中，已特徵化出兩種結構上不相關的DGAT酶(DGAT1和DGAT2)。DGAT1在腸中高表現，並且在脂肪吸收中扮演起核心角色(Buhman, K. K., 等人，2002,J. Biol. Chem .,277 , 25474-25479)。DGAT2在肝臟和脂肪中高度表現(Cases, S., 等人，2001,J. Biol. Chem .,276 , 38870-38876)。在臨床前模式中，使用反義寡核苷酸阻斷肝DGAT2導致多個編碼涉及脂質生成的蛋白質的基因表現下調控及在氧化路徑中的平行誘導。這些變化的淨結果是降低肝DAG和TG脂質的量，進而降低肝細胞脂質負擔，並降低肝極低密度脂蛋白(VLDL)TG的分泌(Choi, C. S.等人，2007.J Biol Chem 282 : 22678-22688及Yu, X. X. 等人，2005,Hepatology ,42 , 362-371)。因此，咸信DGAT2的藥理抑制將對NAFLD/NASH和其他代謝性疾病包括血糖控制和血漿膽固醇的治療呈現有益功效。
特別地，鑑於以NASH/NAFLD抑制DGAT2與相關疾病/病症之間存在正向關聯性，式(I)或(II)化合物借助藥理作用有用於預防、阻止及/或逆行NASH/NAFLD和相關疾病狀態。
再者，管理機構認可的NASH第III期研究的條件批准係基於肝活體組織切片獲得的組織學替代標記。這些一般接受的替代方案是：i)NASH的解除而無纖維化惡化(即，纖維化階段的數值增加)； ii)纖維化減少一或多個階段而不會使NASH惡化。可以在以下文獻中發現細節：Ratziu, A critical review of endpoints for non-cirrhotic NASH therapeutic trials, Journal of Hepatology, 2018, 68. 353-361，以及其中的參考文獻。
另外，管理機構希望自基線改變非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)活動性評分(NAS)。NAFLD活動性評分(NAS)是綜合評分，等同於脂肪變性等級(0至3)、小葉炎症等級(0至3)、及肝細胞腫脹等級(0至2)的總和，來自肝活體組織切片之中央病理學家評分。NAS的總體規模為0至8，得分越高表示疾病越嚴重。結果測量，在NAFLD活動性評分(NAS)中自基線的變化，具有-8至+8的可能範圍，負值表示較好的結果(改善)，而正值表示較差的結果。NAS的要素評分如下：脂肪變性等級0 = ＜5% 脂肪變性，1 = 5-33% 脂肪變性，2 = 34-66% 脂肪變性，3 =＞ 66% 脂肪變性。小葉炎症等級=小葉炎症的量(合併單核、脂肪肉芽腫和多形核(pmn)病灶)：0 = 0，1 = ＜2在20x放大倍率下，2 = 2-4在20x放大倍率下，3 =＞ 4在20x放大倍率下。肝細胞腫脹0 =無，1 =輕度，2 =輕度以上。
由於其藥理作用，式(I)或(II)化合物有用於治療高脂血症、第I型糖尿病、第II型糖尿病、原發性第I型糖尿病(第Ib型)、潛伏型成人自體免疫糖尿病(LADA)、早發性第2型糖尿病(EOD)、年輕發病非典型糖尿病(YOAD)、年輕人成年型糖尿病 (MODY)、營養不良相關性糖尿病、妊娠糖尿病、冠狀動脈心臟疾病、缺血型腦中風、血管成形術後再狹窄、末梢血管疾病、間歇性跛行、心肌梗塞、異常血脂症、飯後脂血症、葡萄糖失耐症(IGT)之病症、受損之空腹血漿血糖的病症、代謝性酸血症、酮病、關節炎、肥胖、骨質疏鬆症、高血壓、充血性心臟衰竭、左心室肥大、周邊動脈疾病、糖尿病視網膜病變、黃斑點退化、白內障、糖尿病腎病變、腎小球硬化、慢性腎衰竭、糖尿病性神經病變、代謝症候群、X症候群、經前症候群、心絞痛、血栓形成、動脈粥樣硬化、暫時性腦缺血、中風、血管再狹窄、高血糖症、高胰島素血症、高三酸甘油酯血症、胰島素抗性、葡萄糖代謝不良、勃起障礙、皮膚及結締組織病症、足潰瘍及潰瘍性結腸炎、內皮細胞功能失調及動脈順應性不良、高apo B脂蛋白血症、 阿茲海默氏症、思覺失調症、認知受損、發炎性腸道疾病、潰瘍性結腸炎、克隆氏病、及腸躁症候群、非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)、或非酒精性脂肪肝疾病 (NAFLD)。
本發明化合物的投予可以經由任何全身性及/或局部遞送本發明化合物的方法。 這些方法包括口服途徑、腸胃外、十二指腸內途徑、頰、鼻內等。一般而言，本發明的化合物經口服投予，但是可以使用腸胃外投予(例如，靜脈內、肌肉內、皮下或髓內)，例如在口服投予不適合目標或患者無法攝入藥物下。
為了對人類患者投予，本文化合物的口服每日劑量可以在1 mg至5000 mg的範圍內，這當然取決於投予的模式和頻率、疾病狀態、以及患者年齡和病症等。可使用口服每日劑量範圍是3 mg至2000 mg。進一步的口服每日劑量在5 mg至1000 mg的範圍內。為了方便起見，本發明化合物可以單位劑型投予。如果需要，可以使用單位劑量型態的每天多次劑量來增加每日總劑量。例如，單位劑型可以是包含約0.1、0.5、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、250、300、500、或1000 mg之本發明化合物的錠劑或囊劑。每日總劑量可以單次或分次劑量投予，並且在醫生的裁量下可能超出本文給出的典型範圍。
為了對人類患者投予，本文中化合物的每日輸注劑量可以在1 mg至2000 mg的範圍內，這當然取決於投予的模式和頻率、疾病狀態、以及患者年齡和病症等。進一步每日輸注劑量在5 mg至1000 mg之間。每日總劑量可以單次或分次劑量投予，並且在醫生的裁量下可能超出本文給出的典型範圍。
根據本發明的治療方法，將本發明化合物或本發明化合物與至少一種額外醫藥劑的組合(本文稱為「組合」)投予到需要此治療的個體，最好呈醫藥組成物的型態。在本發明的組合態樣中，本發明化合物和至少一種其他醫藥劑(例如，另一種抗肥胖劑)可以分別投予或以包含二者的醫藥組成物投予。一般較佳為此等投予為口服。
當一起投予本發明化合物和至少一種其他醫藥劑的組合時，此投予可以是按時間依序或是同時。一般較佳為同時投予藥物組合。對於依序投予，可以以任何順序投予本發明化合物和另外的醫藥劑。一般較佳為此等投予為口服。特佳為此投予為口服且同時。當依次投予本發明化合物和額外的醫藥劑時，可以藉由相同或不同的方法來投予各者。
根據本發明的方法，本發明化合物或組合較佳以醫藥組成物的型態投予。因此，可以將本發明化合物或組合分別或以任何習知口服、直腸、經皮、腸胃外(例如，靜脈內、肌肉內或皮下)、腦池內、陰道內、腹膜內、局部(例如，粉劑、軟膏、乳膏、噴霧劑或洗劑)、頰或鼻腔劑型(例如，噴霧劑、滴劑或吸入劑)一起投予到患者。
本發明化合物或組成物可以單獨投予，但是一般與本領域已知並且根據預期的投予途徑和標準醫藥實施選擇的一種或多種合適的醫藥賦形劑、佐劑、稀釋劑或載劑混合投予。可以調配本發明化合物或組成物以提供即時、延遲、修飾、持續、脈衝或控制釋放劑型，取決於所欲的投予途徑和與治療需要相稱的釋放概況的特異性。
醫藥組成物包含本發明化合物或組合，以一般下述範圍的量：組成物的約1% 至約75%、80%、85%、90%或甚至95%(按重量計)，通常在約1%、2%或3%至約50%、60%或70%的範圍內，更經常在約1%、2%或3%至少於50%的範圍內，諸如：約25%、30%或35%。
製備具有特定量的活性化合物的各種醫藥組成物的方法是發明所屬技術領域中具有通常知識者已知。例如，見Remington: The Practice of Pharmacy, Lippincott Williams and Wilkins, Baltimore Md. 20.sup.th ed. 2000。
適用於腸胃外注射的組成物一般包括醫藥上可接受之無菌水溶液或非水溶液、分散體、懸浮液、或乳劑，以及用於重建為無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末。合適的水性和非水性載劑或稀釋劑(包括溶劑和媒劑)之例子包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、其合適的混合物、三酸甘油酯(包括植物油，諸如：橄欖油)、以及可注射的有機酯類(諸如：油酸乙酯)。較佳的載劑是具有甘油或丙二醇之Miglyol.RTM品牌辛酸/癸酸酯(例如，Miglyol.RTM. 812、Miglyol.RTM. 829、Miglyol.RTM. 840)，從Condea Vista Co., Cranford, N.J獲得。例如，藉由使用塗層，諸如：卵磷脂、在分散體的情況下藉由保持所需的粒度、以及藉由使用介面活性劑可以保持適當的流動性。
用於腸胃外注射的這些組成物亦可以包含賦形劑，諸如：防藏劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。可以各種抗細菌和抗真菌劑，例如，對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、酚、山梨酸等來完成防止組成物的微生物污染。包括等張劑，例如糖、氯化鈉等也可能為所欲。藉由使用能夠延遲吸收的劑，例如單硬脂酸鋁和明膠，可以帶來延長可注射醫藥組成物的吸收。
用於口服投予的固體劑型包括囊劑、錠劑、咀嚼劑、口含錠、丸劑、粉劑及多顆粒製劑(顆粒劑)。在此固體劑型中，將本發明化合物或組合與至少一種惰性賦形劑、稀釋劑或載劑混合。合適的賦形劑、稀釋劑或載劑包括材料，諸如：檸檬酸鈉或磷酸二鈣及/或(a)一或多種填充劑或增量劑(例如，微晶纖維素(可從FMC Corp.以Avicel.TM.獲得)澱粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、矽酸、木糖醇、山梨醇、右旋糖、磷酸氫鈣、糊精、α-環糊精、β-環糊精、聚乙二醇、中鏈脂肪酸、氧化鈦、氧化鎂、氧化鋁等)；(b)一或多種黏合劑(例如，羧基甲基纖維素、甲基纖維素、羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、明膠、阿拉伯膠、乙基纖維素、聚乙烯醇、聚三葡萄糖、預糊化澱粉、瓊脂、西黃蓍膠、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖、阿拉伯膠等；(c)一或多種保濕劑(例如，甘油等)；(d)一或多種崩解劑(例如，瓊脂-瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或樹薯澱粉、海藻酸、某些複雜的矽酸鹽、碳酸鈉、月桂基硫酸鈉、羥乙酸澱粉鈉(從Edward Mendell Co.以Explotab.TM.獲得)、交聯聚乙烯吡咯啶酮、A型交聯羧甲基纖維素鈉(croscarmellose sodium) (以Ac-di-sol.TM.獲得)、拉克林鉀(polyacrilin potassium)(離子交換樹脂)等) (e)一或多種溶液緩聚劑(例如石蠟等) (f)一或多種吸收加速劑(例如，四級銨化合物等)；(g)一或多種潤濕劑(例如十六烷醇、甘油單硬脂酸酯等)；(h)一或多種吸附劑(例如高嶺土、皂土等)；及/或(i)一或多種潤滑劑(例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、硬脂酸、硬脂酸聚烴氧酯(polyoxyl stearate)、鯨蠟醇、滑石粉、氫化蓖蔴油、脂肪酸的蔗糖酯、二甲基聚矽氧烷、微晶蠟、黃蜂蠟、白蜂蠟、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉等)。在囊劑與錠劑情況下，劑型亦可包含緩衝劑。
相似類型之固體組成物也可作為在使用如乳糖或牛奶糖的此賦形劑及高分子量聚乙二醇等之軟或硬充填明膠囊劑中的填充劑。
固體劑型(諸如：錠劑、糖衣錠、囊劑、與顆粒)可用塗層與殼製備，諸如，腸衣塗層與本技術領域中眾所周知的其他者。其也可含有失透劑，且也可以是以延遲方式釋放本發明之化合物及/或額外的醫藥劑之此組成物。可用的嵌埋組成物例子是聚合物質與蠟。藥物也可呈微囊封型態，如果合適的話，具有上述賦形劑中一或多者。
就錠劑而言，活性劑典型地會佔調配物的少於50(重量)%，例如少於約10重量%，諸如5重量%或2.5重量%。調配物之主要部分包含填充劑、稀釋劑、崩散劑、潤滑劑及視需要的調味劑。這些賦形劑之組成是本技術領域眾所周知。通常，填充劑/稀釋劑會包含下列組分中二或更多者之混合物：微晶纖維素、甘露糖醇、乳糖(所有類型)、澱粉、及磷酸二鈣。填充劑/稀釋劑混合物典型地佔調配物的少於98%且較佳為少於95%，例如93.5%。較佳崩散劑包括Ac-di-sol.TM.、Explotab.TM.、澱粉與月桂基硫酸鈉。當存在時，崩散劑通常會佔調配物之少於10%或少於5%，例如約3%。較佳潤滑劑為硬脂酸鎂。當存在時，潤滑劑通常會佔調配物的少於5%或少於3%，例如約1%。
錠劑可藉由標準製錠法例如直接壓錠法或濕式、乾式或熔融製粒法、熔融凍凝法與擠出法來製造。錠劑核心可為單層或多層並可以經本領域已知的合適外層包覆。
口服投予的液體劑型包括醫藥上可接受之乳劑、溶液、懸浮液、糖漿、與酏劑。除本發明的化合物或組合之外，液體劑型可包含在本領域中常用的惰性稀釋劑，諸如：水或其他溶劑、助溶劑與乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄基醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺、油類(例如棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄欖油、蓖蔴油、芝麻油等)、Miglyole.RTM.(從CONDEA Vista Co., Cranford, N.J.獲得)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇與山梨糖醇酐之脂肪酸酯、或這些物質的混合物等。
除了此惰性稀釋劑之外，組成物亦可包括賦形劑，諸如：潤濕劑、乳化劑與懸浮劑、甜味劑、調味劑、與芳香劑。
本發明之化合物或組合的口服液體型態包括溶液，其中活性劑被完全溶解。溶劑例子包括適合口服投予之所有醫藥上有前例的溶劑，特別是其中本發明之化合物顯示良好溶解性者，例如聚乙二醇、聚丙二醇、食用油與以甘油基為基礎的系統與以甘油酯為基礎的系統。以甘油基為基礎的系統與以甘油酯為基礎的系統可包括例如下列品牌產品(與對應之一般產品)：Captex.TM.355 EP(甘油基三辛酸酯/癸酸酯，來自Abitec,Columbus Ohio)、Crodamol.TM.GTC/C(中鏈三酸甘油酯，來自Croda,Cowick Hall,UK)或Labrafac.TM.CC(中鏈甘油三酸酯，來自Gattefosse)、Captex.TM.500P(甘油基三乙酸酯，即，triacetin，來自Abitec)、Capmul.TM. MCM (中鏈甘油一酸酯與中鏈甘油二酸酯，來自Abitec)、Migyol.TM.812(辛酸/癸酸三酸甘油酯，來自Condea,Cranford N.J.)、Migyol.TM.829(辛酸/癸酸/琥珀酸三酸甘油酯，來自Condea)、Migyol.TM.840(丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯，來自Condea)、Labrafil.TM.M1944CS(油醯基聚乙二醇-6甘油酯，來自Gattefosse)、Peceol.TM.(甘油一油酸酯，來自Gattefosse)及Maisine.TM.35-1(甘油一油酸酯，來自Gattefosse)。特別關注的是中鏈(約C8至C10)三酸甘油酯油類。這些溶劑常構成組成物之主要部分，即，大於約50%，通常大於約80%，例如約95%或99%。也可包括與溶劑一起的佐劑與添加劑主要是味覺掩蔽劑、適口劑與調味劑、抗氧化劑、安定劑、質地調節劑與黏度調節劑及助溶劑。
除了本發明的化合物或組合之外，懸浮液還可進一步包含載劑，諸如：懸浮劑，例如，乙氧基化異十八醇、聚氧乙烯山梨醇與山梨醇酐酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂-瓊脂、與西黃蓍膠、或這些物質的混合物等。
用於直腸或陰道投予的組成物較佳包含栓劑，其可以藉由將本發明化合物或組合與合適的非刺激性賦形劑或載劑(諸如：可可脂、聚乙二醇或栓劑蠟，其在一般室溫下為固體，但在體溫下為液體)混合而製備，因此在直腸或陰道腔內融化，從而釋放出活性成分。
用於本發明化合物或組合的局部投予的劑型包括軟膏、乳膏、洗劑、粉劑和噴霧劑。將藥物與醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑或載劑以及可能需要的任何防腐劑、緩衝劑或推進劑混合。
一些本發明化合物可能難溶於水，例如，小於約1 µg/mL。因此，在溶解的非水性溶劑(諸如：上述討論的中鏈三酸甘油酯油)中的液體組成物是這些化合物的較佳劑型。
固體非晶形分散體，包括藉由噴霧乾燥法形成的分散體，亦為難溶性本發明化合物的較佳劑型。「固體非晶形分散體」是指其中至少一部分難溶性化合物是呈非晶形型態並分散在水溶性聚合物中的固體材料。「非晶形」是指難溶性化合物不是結晶。「結晶」是指化合物在各維度中，在100個重複單元的三個維度上呈現長程有序。因此，術語非晶形不僅旨在包括基本上無序的材料，還包括可能具有一些小程度有序的材料，而但該有序少於三個維度及/或僅在短距離上。非晶形材料可以藉由本領域已知的技術特徵化，諸如：粉末X射線繞射(PXRD)結晶學、固態NMR、或熱技術，諸如：微差掃描熱量法(DSC)。
較佳地，固體非晶形分散體中的難溶性化合物的至少主要部分(即，至少約60wt%)是非晶形。化合物可以相對純的非晶形結構域或區域存在於固體非晶形分散體中，作為均質地分佈在整個聚合物中的化合物的固溶體或這些狀態或位於它們之間的那些狀態的任何組合。較佳地，固體非晶形分散體是實質上均質，使得非晶形化合物盡可能均勻地分散在整個聚合物中。如本文所用，「基本上均質」是指存在於固體非晶形分散體中以相對純的非晶形結構域或區域存在的化合物的部分相對小，按藥物總量的小於20wt%，較佳小於10wt%之順序。
適用於固體非晶形分散體的水溶性聚合物應該是惰性的，意義為其不會以不良方式與難溶性化合物產生化學反應，為醫藥上可接受，並且在生理相關pH值(例如，1-8) 的水溶液中具有至少一定的溶解度。聚合物可以是中性的或可離子化，並且在1-8的pH範圍的至少一部分應具有至少0.1mg/mL的水性溶解性。
適用於本發明的水溶性聚合物可以是纖維素或非纖維素。聚合物在水溶液中可以是中性或可離子化。其中，較佳為可離子化且纖維素之聚合物，更較佳為可離子化纖維素聚合物。
例示性水溶性聚合物包括羥基丙基甲基纖維素乙酸琥珀酸酯(HPMCAS)、羥基丙基甲基纖維素(HPMC)、羥基丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)、羧基甲基乙基纖維素(CMEC)、鄰苯二甲酸乙酸纖維素(CAP)、苯三甲酸乙酸纖維素(CAT)、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、羥基丙基纖維素(HPC)、甲基纖維素(MC)、環氧乙烷和環氧丙烷的嵌段共聚物(PEO/PPO、亦已知為泊洛沙姆(poloxamer))及其混合物。特佳的聚合物包括HPMCAS、HPMC、HPMCP、CMEC、CAP、CAT、PVP、泊洛沙姆及其混合物。最較佳的是HPMCAS。參見歐洲專利申請公開案第0 901 786 A2號，其公開以引用方式併入本文。
固體非晶形分散體可以根據形成固體非晶形分散體的任何方法製備，其導致至少大部分(至少60%)的難溶性化合物處於非晶形狀態。這樣的過程包括機械、熱和溶劑方法。例示性的機械方法包括研磨和擠壓；熔融方法包括高溫熔融化、溶劑改質的熔化和熔凝方法；以及溶劑方法包括非溶劑沉澱、噴霧塗佈和噴霧乾燥。見，例如，下述美國專利案、其相關揭露以引用方式併入本文：第5,456,923號和第5,939,099號，其描述藉由擠出方法形成分散體；第5,340,591號和第4,673,564號描述藉由研磨方法形成分散體；以及第5,707,646號和第4,894,235號描述藉由熔凝方法形成分散體。在較佳的方法中，固體非晶形分散體藉由噴霧乾燥形成，如歐洲專利申請公開案第0 901 786 A2號中所揭露。在此方法中，將化合物和聚合物溶解在諸如：丙酮或甲醇之溶劑中，且然後藉由噴霧乾燥將溶劑從溶液中迅速去除，以形成固體非晶形分散體。固體非晶形分散體可以被製備成包含至多約99 wt%的化合物，例如，根據需要為1 wt%、5 wt%、10 wt%、25 wt%、50 wt%、75 wt%、95 wt%、或98wt%。
固體分散體可以本身用作為劑型，或者可以在製備其他劑型，諸如：囊劑、錠劑、溶液或懸浮液中用作製造用途產品(MUP)。水性懸浮液的例子是1：1(w/w)化合物/HPMCAS-HF噴霧乾燥的分散體的水性懸浮液，分散體在2%的聚山梨醇酯-80中包含2.5 mg/mL的化合物。用於錠劑或膠囊的固體分散體一般將與典型在此類劑型中發現的其他賦形劑或佐劑混合。例如，用於囊劑的例示性填充劑包含2：1(w/w)化合物/HPMCAS-MF噴霧乾燥的分散體(60%)、乳糖(快速流動)(15%)、微晶纖維素(例如，Avicel.sup.(R0-102) (15.8%)、澱粉鈉(7%)、月桂基硫酸鈉(2%)和硬脂酸鎂(1%)。
HPMCAS聚合物可分別從Shin-Etsu化學Co., LTD, Tokyo, Japan以低、中和高等級的Aqoa.sup.(R)-LF、Aqoat.sup.(R)-MF及Aqoat.sup.(R)-HF獲得。較高的MF和HF等級為一般較佳。
方便地，可以在飲用水中攜帶本發明化合物(或組合)，以便在每日供水中攝取治療劑量的化合物。化合物可以直接計量加入飲用水中，最好以液態水溶性濃縮物(諸如：水溶性鹽的水溶液)型態。
例如，對於上列詳述適應症，亦可將這些化合物投予到除人類以外的動物。各活性成分的精確投予劑量將取決於許多因素變化，包括，但不限於，動物的類型和所治療的疾病狀態類型、動物的年齡、以及投予途徑。
使用與式(I)或(II)化合物聯合使用的組合醫藥劑的劑量對於所治療的適應症是有效。此劑量可以藉由諸如：以上述引用並在本文中提供的標準檢定來測定。組合劑可以同時或以任何順序依序投予。
這些劑量基於具有重量約60 kg至70 kg的普通人類個體。對於重量超出此範圍的個體(諸如：嬰兒和老年人)，醫師將很容易確定劑量。
可以調整劑量方案以提供最佳的所欲反應。例如，可投予單次推注，隨時間可以投予數次分開劑量，或者可以根據治療情況的緊急程度所示按比例減少或增加劑量。以劑量單位型態調配腸胃外組成物是特別有利，以易於投予和劑量均勻。如本文所用，劑量單位型態是指適合作為待治療的哺乳動物個體的單位劑量的物理上離散單位；各單位包含經計算以產生與所需醫藥載劑結合的所欲治療效果的預定量之活性化合物。本發明的劑量單位型態的規範由下述規定且直接取決於下述：(a)化學治療劑的獨特特徵和要達到的特定治療或預防功效，以及(b)配製此活性化合物治療個體敏感性領域中固有的局限性。
因此，基於本文提供的揭露，發明所屬技術領域中具有通常知識者將理解，根據治療領域眾所周知的方法調節劑量和投予方案。即，可以容易地建立最大可耐受劑量，並且亦可以確定向患者提供可檢測的治療益處的有效量，給予各劑以向患者提供可檢測的治療益處的時間要求也可以如此。因此，儘管本文舉例說明某些劑量和投予方案，但是這些實施例絕不限制在實施本發明時可以提供給患者的劑量和投予方案。
應當注意，劑量值可以隨要減輕的病症的類型和嚴重性而變化，並且可以包括單次或多次劑量。還應理解，對於任何特定個體，應根據個別需要和投予或監督組成物的投予者的專業判斷，隨時間調整特定的劑量方案，並且本文列出的劑量範圍僅是例示性且不旨在限制所主張的組成物的範圍或實踐。例如，可以基於藥物動力學或藥效動力學參數調節劑量，其可以包括臨床功效，諸如：毒性功效及/或實驗室值。因此，本發明涵蓋由技術人員所確定的患者內劑量遞增。確定用於投予化學治療劑的合適劑量和方案在相關領域中是眾所周知，並且一旦提供本文所揭露的教示，就應當被技術人員理解為涵蓋在內。
本發明進一步包括式(I)或(II)之化合物用作為藥劑(諸如：單位劑量錠劑或單位劑量囊劑)之用途。在另一具體實施例中，本發明包括式(I)或(II)之化合物用於製造治療一或多種在上述討論治療方法的章節中先前所辨識的病症的藥劑(諸如：單位劑量錠劑或單位劑量囊劑)之用途。
本發明的醫藥組成物可以作為單一單位劑量或作為複數個單一單位劑量製備、包裝或批量出售。如本文所用，「單位劑量」是包含預定量的活性成分的醫藥組成物之離散量。活性成分的量一般等於將被投予到個體的活性成分的劑量或此劑量的方便部分，諸如：此劑量的二分之一或三分之一。
這些劑和本發明化合物可以與醫藥上可接受之媒劑組合，諸如：鹽、林格氏溶液、右旋糖溶液等。特定的劑量方案(即，劑量、時間和重複劑量)將取決於特定個體以及該個體的病史。
可接受的載劑、賦形劑或安定劑在使用的劑量和濃度下對接受者無毒，並且可以包含以下緩衝劑：磷酸鹽、檸檬酸鹽和其他有機酸；鹽類，諸如：氯化鈉；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫胺酸；防腐劑(諸如：十八基二甲基苄基氯化銨；六羥季銨氯化物；氯化苄烷銨、氯化苯釷；酚、丁基或苄基醇；對羥基苯甲酸烷酯，諸如：甲基或丙基對羥苯甲酸酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；以及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多胜肽；蛋白質，諸如：血清白蛋白、明膠或Ig；親水性聚合物，諸如：聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如：甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸、或離胺酸；單醣、二醣和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如：EDTA；糖類，諸如：蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽的相對離子，諸如：鈉；金屬錯合物(例如，鋅蛋白質錯合物)；及/或非離子介面活性劑，諸如：TWEENTM 、PLURONICSTM 或聚乙二醇(PEG)。
包含這些劑及/或本發明化合物的脂質體是藉由本領域已知的方法製備，諸如：描述於美國專利案第4,485,045號和第4,544,545號。在美國專利案第5,013,556號中揭露具有增強之循環時間的脂質體。特別有用的脂質體可以藉由逆相蒸發法，用包含卵磷脂、膽固醇和PEG衍生的磷脂乙醇胺(PEG-PE)的脂質組成物產生。通過經定義孔徑的過濾器擠出脂質體，以產生具有所欲直徑的脂質體。
這些劑及/或本發明化合物也可被包埋在微囊劑中，微囊劑例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合製備，例如，羥基甲基纖維素或明膠-微囊劑和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微囊劑分別在膠體藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球、微乳劑、奈米粒子和奈米囊劑)中或在巨乳劑中。此技術揭露在Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Mack Publishing (2000)。
可以使用持續釋放製劑。持續釋放製劑的合適例子包括包含本發明化合物的固體疏水性聚合物的半可滲透性基質，基質呈定形物件型態，例如，膜或微囊劑。持續釋放基質的例子包括聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥基乙基-甲基丙烯酸酯)、或聚(乙烯基醇))、聚乳酸(美國專利案第3,773,919號)、L-麩胺酸和乙基-L-麩胺酸酯的共聚物、不可降解的乙烯/乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，諸如：以LUPRON DEPOTTM (由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林所構成的可注射微球)所用者、蔗糖乙酸異丁酸酯、以及聚D-(-)-3-羥基丁酸。
用於靜脈內投予的製劑必須是無菌。這很容易藉由例如通過無菌過濾膜的過濾來完成。一般將本發明化合物置於具有無菌進入口的容器中，例如，靜脈內溶液袋或具有藉由皮下注射針可刺穿的塞子的小瓶。
合適的乳劑可以使用商業上可獲得的脂肪乳劑製備，諸如：IntralipidTM 、LiposynTM 、InfonutrolTM 、LipofundinTM 及LipiphysanTM 。活性成分可以溶解在預混合的乳劑組成物中，或者可以溶解在油(例如，大豆油、紅花油、棉籽油、芝麻油、玉米油或杏仁油)且與磷脂(例如，蛋磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)和水混合後形成乳劑。應當理解，可以添加其他成分，例如，甘油或葡萄糖，以調節乳劑的張力。合適的乳劑典型包含至多20%的油，例如，5至20%。脂肪乳劑可包含0.1至1.0 μm，特別是0.1至0.5 μm的脂肪滴，並且具有5.5至8.0的pH。
乳劑組成物可以藉由將本發明化合物與IntralipidTM 或其組分(大豆油、蛋磷脂、甘油和水)混合而製備者。
用於吸入或吹入的組成物包括在醫藥上可接受之水性或有機溶劑中的溶液和懸浮液、或其混合物、以及粉劑。液體或固體組成物可包含如上所述的合適的醫藥上可接受之賦形劑。在一些具體實施例中，藉由口服或經鼻呼吸途徑投予組成物供局部或全身性功效。在較佳無菌的醫藥上可接受之溶劑中的組成物可以藉由使用氣體霧化。霧化的溶液可以直接從霧化裝置中吸入，或者霧化裝置可以連接到面罩、帳篷或間歇性正壓呼吸機上。溶液、懸浮液或粉劑組成物可以從適當方式遞送調配物的裝置，較佳口服或經鼻投予。
本文的化合物可以調配為用於口服、經頰、鼻內、腸胃外(例如，靜脈內、肌肉內或皮下)或直腸投予或以適於藉由吸入投予的型態。 本發明化合物亦可經調配用於持續遞送。
製備具有一定量活性成分的各種醫藥組成物的方法對於發明所屬技術領域中具有通常知識者而言是已知，或者根據本揭露將是顯而易見。對於製備醫藥組成物的方法的例子，見Remington’s Pharmaceutical Sciences, 20th Edition (Lippincott Williams & Wilkins, 2000)。
根據本發明的醫藥組成物可包含0.1%至95%的本發明化合物，較佳1%至70%。無論如何，待投予的組成物將包含一定量的本發明化合物，其量有效治療所治療的個體的疾病/病症。
由於本發明具有態樣係關於可以分開投予活性成分的組合來治療本文所述的疾病/病症，因此本發明亦關於呈套組型態組合個別醫藥組成物。套組包含兩個個別醫藥組成物：式(I)或(II)之化合物、其前藥、或此化合物或前藥之鹽、和上述的第二化合物。套組包括用於包含個別組成物的工具，諸如：容器、個別瓶子或個別鋁箔包裝。典型地，套組包含投予個別組分的指導。當個別組分較佳以不同的劑型(例如，口服和腸胃外)投予、以不同的劑量間隔投予、或者當處方醫師需要滴定組合的個別組分時，套組型態是特別有利。
這種套組的例子是所謂的鼓泡包裝。鼓泡包裝在包裝產業中是眾所周知，並且被廣泛用於醫藥單位劑型(錠劑、囊劑等)的包裝。鼓泡包裝一般由有較佳為透明塑膠材料的箔覆蓋相對硬的材料片所組成。在包裝過程中，在塑膠箔中形成凹口。凹口具有待包裝的錠劑或囊劑的尺寸和形狀。接下來，將錠劑或囊劑置於凹口中，並將相對硬的材料片在與其中形成凹口的方向相反的箔面上對著塑膠箔密封。因此，錠劑或囊劑被密封在塑膠箔和片之間的凹口中。較佳地，片的強度使得可以藉由在凹口上手動施加壓力而從鼓泡包裝中取出錠劑或囊劑，從而在片中在凹口處形成開口。然後可以通過開口將錠劑或囊劑取出。
可能需要在套組上以例如錠劑或囊劑旁邊的數字的型態提供記憶輔助，其中數字對應於應攝入如此指定的錠劑或囊劑的方案的天數。此記憶輔助的另一個例子是印在卡上的日曆，例如，如下「第一周，星期一，星期二等…第二週，星期一，星期二…」等。記憶輔助的其他變異將輕易顯而易見。「每日劑量」可以是在給定日子服用的單一個錠劑或囊劑或數個丸劑或囊劑。同樣，式(I)或(II)化合物的每日劑量可由一錠劑或囊劑所組成，而第二化合物的每日劑量可以由數個錠劑或囊劑組成，反之亦然。記憶輔助應該反映這一點。
在本發明的另一特定具體實施例中，提供了分配器，該分配器被設計為按其預期用途的順序一次分配每日劑量。較佳地，分配器配備有記憶輔助裝置，以便進一步協助對方案的依從性。此記憶輔助的例子是機械計數器，其指示已經分配的每日劑量的數量。此記憶輔助的另一個例子是電池供電的微晶片存儲器，其與液晶讀數或聽覺提示訊號結合，例如，讀出上一次已服用的每日劑量的日期及/或提示何時服用下一次劑量。
同樣，由於本發明具有態樣關於用可以聯合投予的活性成分的組合來治療本文所述的疾病/病症，因此本發明亦關於將個別醫藥組成物組合成單一劑型，諸如：(但不限於)單一錠劑或囊劑、雙層或多層錠劑或囊劑、或通過使用錠劑或囊劑中的分離成分或隔室。
活性成分可以在水性或非水性媒劑中以溶液遞送，具有或不具有額外溶劑、共溶劑、賦形劑或從醫藥上可接受之稀釋劑、賦形劑、媒劑、或載劑中選擇之錯合劑。
可以將活性成分與醫藥上可接受之賦形劑調配成固體分散體或自乳化藥物遞送系統(SEDDS)。
活性成分可以調配成立即釋放或懸浮釋放錠劑或囊劑。或者，活性成分可以作為活性成分單獨地在囊劑殼內遞送，而無需額外賦形劑。 實施例實驗程序
除非另有指定，否則起始材料一般可從商業來源獲得，諸如：Aldrich Chemicals Co. (Milwaukee、WI)、Lancaster Synthesis、Inc. (Windham、NH)、Acros Organics (Fairlawn、NJ)、Maybridge 化學Company、Ltd. (Cornwall、England)及Tyger Scientific (Princeton、NJ)。已使用某些常見的縮寫和首字母縮寫詞，可包括：AcOH (乙酸)、DBU (1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一-7-烯)、CDI (1,1’-羰基二咪唑)、DCM (二氯甲烷)、DEA (二乙胺)、DIPEA (N,N-二異丙基乙基胺)、DMAP (4-二甲基胺基吡啶)、DMF (N ,N -二甲基甲醯胺)、DMSO (二甲基亞碸)、EDCI (1-[3-(二甲基胺基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)、Et2 O (二乙基醚)、EtOAc (乙酸乙酯)、EtOH (乙醇)、HATU (O -(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’ -四甲基脲鎓六氟磷酸酯)、HBTU (O-苯并三唑-1-基-N,N,N’,N’ -四甲基脲鎓六氟磷酸酯)、HOBT (1-羥基苯并三唑)、iPrOH (2-丙醇)、KHMDS (雙(三甲基矽基)醯胺鉀)、MeOH (甲醇)、MTBE (三級丁基甲基醚)、NaBH(OAc)3 (三乙醯氧基硼氫化物鈉)、NaHMDS (雙(三甲基矽基)醯胺鈉)、NMP (N-甲基吡咯啶酮)、SEM ([2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基)、TEA (三乙胺)、TFA (三氟乙酸)、THF (四氫呋喃)、及T3P (丙烷膦酸酐；2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三膦烷 2,4,6-三氧化物)。
反應在空氣中或在使用氧氣或濕氣敏感試劑或中間體時在惰性氛圍(氮氣或氬氣)下進行。適當時，使用熱槍在動態真空下乾燥反應設備，並使用無水溶劑(來自Aldrich 化學Company的Sure-SealTM 產品，來自EMD Chemicals, Gibbstown, NJ的Milwaukee、Wisconsin或DriSolvTM 產品)。在一些情況下，使商業溶劑通過裝有4Å分子篩的管柱，直到達到以下水之QC標準：a)對二氯甲烷、甲苯、N,N -二甲基甲醯胺、及四氫呋喃＜100 ppm；b)對於甲醇、乙醇、1,4-二㗁烷、及和二異丙基胺＜180 ppm。對於非常敏感的反應，將溶劑用金屬鈉、氫化鈣或分子篩進一步處理，並在使用前蒸餾。其他商業溶劑和試劑無需進一步純化即可使用。對於其他實施例或方法中的合成參考程序，反應條件(反應時間和溫度)可能不同。在進行進一步的反應或提交於生物學測試之前，產品一般在真空下乾燥。
當指示時，使用Biotage Initiator或Personal Chemistry Emrys Optimizer微波藉由微波輻射加熱反應。使用薄層層析法(TLC)、液相層析法-質譜法(LCMS)、及/或高效能液相層析法(HPLC)監控反應進程。TLC在帶有螢光指示劑(254 nm激發波長)的預塗矽膠板上進行，並在UV光下及/或以I2 、KMnO4 、CoCl2 、磷鉬酸、及/或鉬酸銨鈰染色顯現。LCMS數據在配備Leap Technologies自動進樣器、Gemini C18管柱，MeCN/水梯度以及TFA、甲酸、或氫氧化銨改質劑的Agilent 1100系列儀器獲得。以100到1200 Da的正離子和負離子模式使用Waters ZQ質譜儀掃描分析柱洗提液。亦使用其他類似的儀器。HPLC數據是在Agilent 1100系列儀器上使用Gemini或XBridge C18管柱、MeCN/梯度以及TFA或氫氧化銨改質劑獲得。使用電子離子化從50到550 Da在HP 5973質量選擇性檢測器掃描分析樣品。使用Isco CombiFlash Companion、AnaLogix IntelliFlash 280、Biotage SP1、或Biotage Isolera One儀器和預裝的Isco RediSep或Biotage Snap氧化矽匣，藉由中效能液相層析法(MPLC)進行純化。使用Berger或Thar儀器；ChiralPAK-AD、-AS、-IC、Chiralcel-OD、或-OJ管柱；以及具MeOH、EtOH、iPrOH、或MeCN之CO2 混合物單獨或使用TFA或iPrNH2 改質，藉由掌性超臨界流體層析法(SFC)進行掌性純化。UV檢測用於觸發餾分收集。對於其他實施例或方法中的合成參考程序，純化方法可能不同：一般而言，選擇溶劑和洗提液/梯度所用的溶劑比以提供適當的Rf 或滯留時間。
從LCMS分析報告質譜法數據。質譜法(MS)通過大氣壓化學離子化(APCI)、電噴霧離子化(ESI)、電子碰撞離子化(EI)或電子散射(ES)離子化源進行。質子核磁光譜法(1 H NMR)化學位移以自四甲基矽烷之百萬分之一的低磁場(part per million downfield)給出，並記錄在300、400、500或600 MHz Varian、Bruker或Jeol光譜儀上。化學位移以相對於氘代溶劑殘留峰的百萬分之一(ppm，δ)表現(氯仿，7.26 ppm；CD2 HOD，3.31 ppm；乙腈-d 2 ，1.94 ppm；二甲基亞碸-d 5 ，2.50 ppm；DHO，4.79 ppm)。峰形描述如下：s，單峰；d，雙峰；t，三重峰；q，四重峰；quin，五重峰；m，多重峰；br，寬單峰；表觀。如上所述，在Berger分析儀器上獲得分析性SFC數據。使用1 dm池在PerkinElmer模式343旋光計上獲取旋光度數據。矽膠層析法主要使用中壓Biotage或ISCO系統，使用由Biotage和ISCO各種商業供應商預包裝的管柱進行。微量分析由Quantitative Technologies Inc.進行，且在計算值的0.4%以內。
除非另有註解，否則化學反應在室溫(約23攝氏度)下進行。
除非另有註解，否則所有反應物為商業上可獲得無需進一步純化或使用文獻中已知的方法製備。
術語「濃縮」、「蒸發」及「真空濃縮」是指在浴溫低於60℃的旋轉式蒸發器上減壓除去溶劑。縮寫「min」和「h」分別代表「分鐘」和「小時」。術語「TLC」是指薄層層析法，「室溫或環境溫度」是指18至25℃之間的溫度，「LCMS」是指液相層析法-質譜法，「UPLC」是指超效能液相層析法，而「HPLC」是指高性能液相層析法，「SFC」是指超臨界流體層析法。
氫化可在Parr振盪器中在加壓氫氣下，或在Thales-nano H-Cube流動氫化設備中，在特定的溫度下，以全氫和1至2 mL/min的流速進行。
HPLC、UPLC、LCMS和SFC滯留時間是使用程序中所註解的方法測量。
在一些實例中，進行掌性分離以分離某些本發明化合物的鏡像異構體(在一些實施例中，根據洗提順序，分離的鏡像異構體被命名為ENT-1和ENT-2；同樣地，根據其洗提順序，將分離的非鏡像異構體命名為DIAST-1和DIAST-2。在一些實施例中，使用旋光計測量鏡像異構物的旋光度。根據其觀察到的旋轉數據(或其特定旋轉數據)，將具有順時針方向旋轉的鏡像異構物命名為(+)-鏡像異構物，且將具有逆時針方向旋轉的鏡像異構物命名為(-)-鏡像異構物。外消旋化合物藉由不存在繪製或描述的立體化學表示，或藉由在結構旁存在(+/-)表示；在後一種情況下，所示的立體化學僅表示構成外消旋混合物的兩個鏡像異構物中的一個。
下述說明各種本發明化合物的合成。本發明範圍內的額外化合物可以使用這些實施例中所說明的方法單獨或與本領域一般已知的技術組合來製備。這些製備和實施例中的所有起始材料都是可商業上可獲得，或者可以藉由本領域已知的方法製備，或者如本文所述。
使用ACD/ChemSketch 2017.2.1，文件版本C40H41，Build 99535(Advanced Chemistry Development, Inc., Toronto, Ontario, Canada)提供的命名約定來命名以下描述的化合物和中間體。ACD/ChemSketch 2017.2.1提供的命名約定是發明所屬技術領域中具有通常知識者眾所周知，並且咸信ACD/ChemSketch 2017.2.1提供的命名約定一般與IUPAC (International Union for Pure and Applied Chemistry)對Nomenclature of Organic Chemistry and the CAS Index規則的建議一致。 製備 P1 2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 } 嘧啶 -5- 羧酸 (P1 )
Figure 02_image007
步驟 1. 2-[(5- 溴吡啶 -3- 基 ) 氧基 ]-3- 乙氧基吡啶 (C1 ) 之合成。
對2-溴-3-乙氧基吡啶 (841 g, 4.16 mol)於N,N -二甲基甲醯胺 (5.4 L) 之溶液添加溴化銅(I)(538 g，3.75 mol)，接著碳酸鉀 (1.04 kg，7.52 mol)。在25℃攪拌所得混合物，且5-溴吡啶-3-醇(652 g，3.75 mol)以一份添加，隨之在120℃下加熱反應混合物16小時。然後冷卻到30℃，及緩慢倒入碎冰(9.0 kg)及氨在水中的10%溶液(7.0 L)的混合物。將所得的懸浮液攪拌1小時之後，藉由過濾收集沉澱物，並以水(3 x 5 L)洗滌濾餅。之後在乙酸乙酯 (8 L)中攪拌1小時並過濾；以飽和氯化鈉水溶液(5 L)洗滌濾液，以硫酸鈉乾燥，過濾，並以真空濃縮。殘質於石油醚(2 L)中攪拌，且藉由過濾收集固體以提供C1 。在減壓下濃縮濾液，且以石油醚(200 mL)研製殘質以給予額外的C1 。合併二批次以提供呈黃色固體之C1 。產量：835 g，2.83 mol, 75%。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 8.48 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 8.44 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.71 (dd,J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.69 (dd,J = 2.2, 2.1 Hz, 1H), 7.24 (dd,J = 7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.03 (dd,J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 4.14 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 1.47 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。步驟 2. 5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 甲腈 (C2 ) 之合成。
對C1 (324 g，1.10 mol)於N,N -二甲基甲醯胺(3.0 L)之溶液以一份添加亞鐵氰化鉀(II)三水化合物(697 g，1.65 mol)，接著為水(300 mL)。將所得懸浮液在真空下脫氣，然後用氮沖吹；進行此抽空沖吹循環總共4次。然後添加乙酸鈀(II) (4.94 g，22.0 mmol)及2-二環己基膦基-2’,4’,6’-三異丙基聯苯 (XPhos；18.7 g，39.2 mmol)，進行抽空沖吹循環5次，及將反應混合物在105 ℃加熱18小時。在反應混合物冷卻到50℃之後，過濾，且將濾液倒到冰水(3 L)，然後攪拌大約1小時。過濾收集所得固體，溶解於乙酸乙酯 (1.5 L)，以飽和氯化鈉水溶液(1 L)洗滌，乾燥，過濾，且真空濃縮以提供呈黃色固體之C2 (209 g)。來自上述之水性濾液以三級丁基 甲基醚(2 x 3 L)萃取，且將合併有機層以飽和氯化鈉水溶液(0.5 L)洗滌，乾燥，過濾，且於減壓下濃縮以提供額外的C2 (20 g)。合併產量：229 g，0.949 mol，86%。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 8.71 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.68 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 7.80 (dd,J = 2.7, 1.7 Hz, 1H), 7.70 (dd,J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.29 – 7.25 (m, 1H, 假設值；被溶劑峰部分遮蓋), 7.08 (dd,J = 8.0, 4.9 Hz, 1H), 4.16 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 1.49 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。步驟 3. 5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 甲脒，鹽酸鹽 (C3 ) 之合成。
對C2 (180 g，0.746 mol)於甲醇(1.3 L)之0℃至5℃懸浮液添加甲氧化鈉於甲醇(5 M；30 mL，150 mmol)之溶液。添加甲醇(500 mL)以協助攪拌，隨之使反應混合物回溫到室溫(18℃)並攪拌20小時。然後冷卻到-40℃並以一份氯化銨(48.0 g，897 mmol) 處理，隨之混合物回溫到室溫(18℃)並攪拌40小時。真空濃縮以移除大約一半的甲醇之後，通過過濾移除所得白色沉澱物 (無機鹽)。以乙酸乙酯(400 mL)稀釋濾液且於減壓下濃縮到大約400 mL的體積。此乙酸乙酯稀釋-濃縮程序重複二次以實現甲醇與乙酸乙酯的交換。過濾所得懸浮液給予呈白色固體之C3 。產量：175 g，0.594 mol，80%。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.82 (d,J = 2 Hz, 1H), 8.77 (d,J = 2.6 Hz, 1H), 8.05 (dd,J = 2, 2 Hz, 1H), 7.66 (dd,J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd,J = 7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.18 (dd,J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 4.17 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 1.37 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。步驟 4. 甲基 2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 } 嘧啶 -5- 羧酸酯 (C4 ) 之合成。
將2-(二甲氧基甲基)-3-甲氧基-3-側氧基丙-1-烯-1-醇鈉(201 g，1.01 mol)以一份添加到C3 (249 g，0.845 mol)於甲醇(1.75 L)之溶液。反應混合物，濃稠懸浮液，在18℃攪拌20小時，隨之藉由過濾收集沉澱物以給予呈白色固體之C4 。產量：259 g，0.735 mol，87%。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.40 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 9.35 (s, 2H), 8.67 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 (dd,J = 2.8, 1.8 Hz, 1H), 7.69 (dd,J = 4.8, 1.5 Hz, 1H), 7.58 (dd,J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.19 (dd,J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 4.18 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 1.36 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。步驟 5. 2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 } 嘧啶 -5- 羧酸 (P1 ) 之合成。
此反應以二平行批次進行：C4 (321 g，0.911 mol)懸浮於甲醇(1.6 L)，在冰水浴中冷卻，並以逐滴方式用氫氧化鈉溶液處理(2 M；684 mL，1.37 mol)。在完成添加之後，在14℃攪拌反應混合物16小時，隨之合併二批次。以水 (3.2 L) 稀釋所得懸浮液，以冰水浴冷卻(大約5℃至10℃)，並藉由逐滴添加1 M鹽酸調整到pH 3至4。在14℃攪拌混合物2小時，然後過濾；以水(2 x 1 L)及乙酸乙酯(1 L)依序洗滌濾餅，給予呈白色固體之P1 。合併產量：557 g，1.65 mol，91%。LCMSm/z 338.9 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.39 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 9.31 (s, 2H), 8.65 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.36 (dd,J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.68 (dd,J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.56 (dd,J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.17 (dd,J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 4.16 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 1.36 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。
使用如上所述的類似程序製作的製備P1 材料進一步使用在配備有Cu輻射源(K-α平均值)的Bruker AXS D8 Endeavor繞射儀上進行的粉末x射線繞射分析來分析。將發散狹縫設定為15 mm連續照明。藉由PSD-Lynx Eye檢測器檢測到繞射輻射，檢測器PSD的開口設在3.00度。X射線管電壓和安培數分別設定為40 kV和40 mA。在Cu波長為3.0到40.0度2-θ的θ-θ測角儀中使用0.01度的步距和1.0秒的步進時間來收集數據。抗散射螢幕設置為1.5 mm的固定距離。在收集過程中，樣品以15/min旋轉。藉由將樣品放置在低矽背景樣品架中製備樣品，並在收集過程中旋轉。
使用Bruker DIFFRAC Plus軟體收集數據，並藉由EVA diffract plus軟體進行分析。峰值搜索之前未處理PXRD數據文件。使用EVA軟體中的峰搜索演算法，將以閾值1選擇的峰用於初步的峰分配。為確保有效性，手動進行調整；目視檢查自動分配的輸出，並調整峰位置以達到峰最大值。一般選擇相對強度 ≥ 3 %的峰。未選擇未解析或與噪聲一致的峰。從在USP中所記載的PXRD的峰位置有關的典型誤差高達±0.2° 2θ(USP-941)。基於晶體尺寸和形態的變化，預期相對峰高的一些變異。圖6提供特徵性x射線粉末繞射圖。來自該圖的PXRD數據在表AA中進一步描述。使用類似的程序，如上所述製備另外二批次製備P1的結晶材料並分析。圖7和圖8提供這些批次的特徵性X射線粉末繞射圖。
Figure 02_image009
Figure 02_image011
C2 之替代合成 5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 甲腈 (C2 )
Figure 02_image013
用氮沖洗2-溴-3-乙氧基吡啶(10.0 g，49.5 mmol)於1,4-二㗁烷(250 mL)之溶液2分鐘。然後添加5-羥基吡啶-3-甲腈(6.54 g，54.4 mmol)、乙酸鈀(II) (556 mg，2.48 mmol)、1,1′-雙(二-三級丁基膦基)二茂鐵(1.41 g，2.97 mmol)、及碳酸銫(32.3 g，99.1 mmol)，並在105℃攪拌反應混合物16小時，隨之與使用2-溴-3-乙氧基吡啶(7.00 g，34.6 mmol)進行的類似反應合併且冷卻到室溫。以乙酸乙酯(200 mL)稀釋之後，通過矽藻土過濾合併之反應混合物且在真空中濃縮至乾燥。以乙酸乙酯(200 mL)稀釋殘質，以飽和氯化鈉水溶液(2 x 200 mL)洗滌，以硫酸鈉乾燥，過濾，且於減壓下濃縮。矽膠層析法 (梯度：在石油醚中之0%至35%乙酸乙酯)給予呈黃色固體之C2 。合併產量：18.0 g，74.6 mmol，89%。LCMSm/z 242.1 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 8.70 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.66 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 7.79 (dd,J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.69 (dd,J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.26 (dd,J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.07 (dd,J = 8.0, 4.9 Hz, 1H), 4.15 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 1.47 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。 製備 P2 2-{5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 } 嘧啶 -5- 羧酸 (P2 )
Figure 02_image015
Figure 02_image017
Figure 02_image019
步驟 1. 2- 溴 -3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 (C5 ) 之合成。
將碳酸鉀 (697 g，5.04 mol) 添加到2-溴-5-氟吡啶-3-醇(745 g，3.88 mol)於N,N -二甲基甲醯胺(4 L)之溶液，隨之將反應容器抽空並充入氮。此抽空循環重複二次，且之後加熱反應混合物到35℃。在30分鐘逐滴添加碘乙烷(372 mL，4.65 mol)，並在35℃攪拌反應混合物16小時之後，將其冷卻到25℃且以水(6 L)稀釋。在25℃繼續攪拌15分鐘；通過過濾收集所得固體，並以三級丁基甲基醚(3 x 1.5 L)萃取濾液。將合併的有機層以硫酸鈉乾燥，過濾，並以真空濃縮。殘質與從第一過濾獲得的固體合併，給予呈褐色固體之C5 。產量：756 g，3.44 mol，89%。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 7.88 (d,J = 2.5 Hz, 1H), 6.90 (dd,J = 9.5, 2.5 Hz, 1H), 4.10 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 1.51 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。步驟 2. 5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 甲腈 (C6 ) 之合成。
此反應分四平行批次進行。以一份添加5-羥基吡啶-3-甲腈(112.6 g，937.5 mmol)及碳酸銫(389 g，1.19 mol)到C5 (187.5 g，852.1 mmol)於1,4-二㗁烷(2.5 L)之溶液。將反應容器抽空並充入氮。此抽空循環重複二次，隨之將乙酸鈀(II) (9.57 g，42.6 mmol)及1,1′-雙(二-三級丁基膦基)二茂鐵(20.2 g，42.6 mmol)添加到反應混合物。如上述重複抽空-氮循環，及之後在85℃攪拌反應混合物16小時。16小時後未完成的任何反應均以額外乙酸鈀(II) (9.57 g，42.6 mmol)及1,1′-雙(二-三級丁基膦基)二茂鐵(20.2 g，42.6 mmol)處理並在85℃下攪拌額外16小時。此時，將四個反應混合物合併並過濾；真空濃縮濾液，並將殘質溶解於乙酸乙酯(3 L)，且之後以水(6 L)稀釋。在25℃攪拌所得混合物15分鐘，隨之分層，且以乙酸乙酯(3 x 1 L)萃取水層。在合併的有機層以飽和氯化鈉水溶液(2 x 3 L)洗滌之後，將其以硫酸鈉乾燥，過濾，並以真空濃縮。在25℃於三級丁基甲基醚(1 L)及石油醚(2 L)的混合物中攪拌殘質20分鐘，並通過過濾收集所得固體以給予呈固體之C6 (813 g)。真空濃縮濾液且經矽膠(梯度：在石油醚中之0%至30%乙酸乙酯)上之層析法以提供額外的呈褐色固體之C6 (52 g)。合併產量：865 g，3.34 mol，98%。LCMSm/z 259.8 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 8.73 - 8.64 (m, 2H), 7.77 (br s, 1H), 7.56 (d,J = 2.5 Hz, 1H), 7.06 (dd,J = 9.0, 2.5 Hz, 1H), 4.14 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 1.50 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。步驟 3. 5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 甲脒，鹽酸鹽 (C7) 之合成。
C6 (919 g，3.54 mol)於乙酸乙酯(3 L)之溶液以活性碳(大約200 g)處理，且之後在77℃攪拌3小時。在所得混合物過濾之後，真空濃縮濾液以提供C6 (894 g，3.45 mol)。然後以三平行批次進行以下反應。添加甲氧化鈉(12.4 g，230 mmol)到0℃C6 (298 g，1.15 mol)於甲醇(2 L)之溶液。在冷卻到-40℃之前，使反應混合物回溫到25℃，然後在25℃攪拌20小時，並以氯化銨處理(67.6 g，1.26 mol)。在此時，使反應混合物回溫到25℃，並在25℃下攪拌40小時，隨之合併三批次並真空濃縮，給予呈棕色膠狀物之(C7 1.15 kg)。此材料直接用於下述步驟。LCMSm/z 276.8 [M+H]+ 。步驟 4. 甲基 2-{5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 } 嘧啶 -5- 羧酸酯 (C8 ) 之合成。
此反應在三平行批次進行。以一份2-(二甲氧基甲基)-3-甲氧基-3-側氧基丙-1-烯-1-醇鈉(357 g，1.80 mol)添加到C7 (來自先前步驟；383 g，≤1.15 mol)於甲醇 (2.5 L)中之25℃溶液。在25℃攪拌16小時之後，如LCMS分析評估，三個反應中的兩個反應完成。第三個(不完全)反應以額外2-(二甲氧基甲基)-3-甲氧基-3-側氧基丙-1-烯-1-醇鈉 (54.9 g，277 mmol)處理，並在25℃下繼續攪拌6小時。在此時，合併三批次，以水(8 L)稀釋，並過濾。在濾餅以水(2 x 2 L)洗滌之後，在25℃於甲醇(1 L)及三級丁基甲基醚(1 L)的混合物中攪拌3小時，隨之過濾懸浮液以提供呈褐色固體之C8 。在2步驟產量：1.0 kg，2.7 mol，78%。LCMSm/z 370.8 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 9.54 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 9.32 (s, 2H), 8.63 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.55 (dd,J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.57 (d,J = 2.5 Hz, 1H), 7.05 (dd,J = 9.2, 2.5 Hz, 1H), 4.16 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 4.00 (s, 3H), 1.51 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。步驟 5. 2-{5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 } 嘧啶 -5- 羧酸 (P2 ) 之合成。
以逐滴方式用氫氧化鈉溶液(2 M；1.01 L, 2.02 mol)處理C8 (500 g，1.35 mol)於甲醇(2 L)之懸浮液。在完成添加之後，在25℃攪拌反應混合物16小時，隨之以水(2 L) 稀釋。然後藉由逐滴添加鹽酸(1 M；大約1.5 L)將pH調整到3至4；在25℃攪拌所得混合物1小時，並藉由過濾收集固體。以水(2 x 1 L)洗滌濾餅以提供呈灰白固體之P2 。產量：405 g，1.14 mol，84%。LCMSm/z 356.8 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.39 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 9.31 (s, 2H), 8.65 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 – 8.34 (m, 1H), 7.71 (d, AB四重峰之組分,J = 2.6 Hz, 1H), 7.68 (dd, ABX系統之組分,J = 9.8, 2.6 Hz, 1H), 4.19 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 1.36 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。 製備 P3 三級丁基(3 S,5 S)-3- 胺基 -5- 氟哌啶 -1- 羧酸酯 (P3 )
Figure 02_image021
Figure 02_image023
此整個順序是大規模進行。一般來說，在反應之前以及添加試劑之後，將反應器抽真空至≤ -0.07 MPa，然後用氮氣填充至常壓。一般重複此過程3次，然後評估氧含量以確保其為≤1.0%。對於有機層的淬滅、萃取和洗滌過程，一般將混合物攪拌15至60分鐘，然後在分離層之前使其沉降15至60分鐘。步驟 1. 甲基 (2 S,4 R)-1- 苄基 -4- 羥基吡咯啶 -2- 羧酸酯 (D1 ) 之合成。
以參考速度為80至120 kg/小時將三乙胺 (93.55 kg，924.5 mol)填充到二氯甲烷 (968 kg)及甲基(2S ,4R )-4-羥基吡咯啶-2-羧酸酯，鹽酸鹽(56.05 kg，308.6 mol) 之15℃至25℃混合物。攪拌混合物10至20分鐘之後，以參考速度為20至30 kg/小時添加溴化苄基(79.00 kg，461.9 mol)。在15℃至25℃攪拌反應混合物；12小時之後，每2至6小時取樣一次，用於通過HPLC分析，直到起始材料的面積百分比為低於2% (HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm，3.5 µm；移動相A：水，包含0.1%七氟丁酸；移動相B：乙腈；梯度：10% B達3分鐘，然後在10分鐘期間10%至40% B，然後在5分鐘期間40%至90% B；流速：1.0 mL/分鐘)。甲基(2S ,4R )-4-羥基吡咯啶-2-羧酸酯之典型滯留時間：3.8分鐘。
然後將水（280kg）以參考速度為100至150 kg /小時和15℃至25℃加入反應器中。以二氯甲烷(372 kg，281 L，5體積)萃取水層一次；將合併的有機層以氯化鈉(93.0 kg)於水 (280 kg)中之溶液洗滌，然後在-0.08 MPa下濃縮至體積為100至150 L，同時溫度維持在35℃以下。將四氫呋喃 (497 kg)以二部分填充到所得混合物。再次在-0.08 MPa下濃縮混合物至體積為100至150 L，同時溫度維持在35℃以下。對殘餘二氯甲烷進行Karl Fischer分析和取樣以確保水含量為≤0.30%且殘餘二氯甲烷為≤4%。將所得溶液調整到15℃至30℃，給予包含D1 之黃色溶液。產量：136.8 kg之溶液，包含D1 (69.14 kg，293.9 mol，95%)。HPLC純度：90% (HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：於水中之10 mM乙酸銨；移動相B：乙腈；梯度：在10分鐘期間20%至95% B；流速：1.0 mL/分鐘)。D1 的滯留時間：4.72分鐘。1 H NMR (401 MHz, 氯仿-d ) δ 7.34 - 7.21 (m, 5H), 4.48 - 4.39 (m, 1H), 3.90 (d,J = 12.9 Hz, 1H), 3.65 (d,J = 12.9 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.59 (dd,J = 7.9, 7.8 Hz, 1H), 3.32 (dd,J = 10.1, 5.7 Hz, 1H), 2.57 (br s, 1H), 2.45 (dd,J = 10.2, 4.1 Hz, 1H), 2.24 (ddd,J = 13.2, 7.7, 6.9 Hz, 1H), 2.07 (ddd,J = 13.3, 8.0, 3.2 Hz, 1H)。步驟 2. 甲基 (2 S,4 S)-1- 苄基 -4- 氟吡咯啶 -2- 羧酸酯 (D2 ) 之合成。
在15℃至25℃將D1 在四氫呋喃中之溶液(128.4 kg，包含64.90 kg，275.8 mol之D1 )添加到包含四氫呋喃(575 kg)之反應器。然後以35至45 kg/小時的參考添加速度添加三乙胺(114.2 kg，1129 mol)。將三乙胺三氫氟化物 (66.70 kg，413.7 mol)填充到混合物，接著以參考速度為60至80 kg/小時填充九氟丁烷-1-磺醯基氟化物(128.0 kg，423.7 mol)，並使反應在15℃至25℃進行。4小時之後，每2至6小時取樣反應混合物，用於通過HPLC分析，直到D1 面積百分比為低於1% (HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：於水中之10 mM乙酸銨；移動相B：乙腈；梯度：在10分鐘期間20%至95% B；流速：1.0 mL/分鐘)。D1 之典型滯留時間：5.0分鐘。
然後將混合物冷卻至10℃至15℃，並以參考速度為100至120 kg/小時添加水(325 kg)，接著在15℃至25℃添加三級丁基甲基醚(240.5 kg)。以碳酸氫鈉(18.2 kg，217 mol)於水(198 kg)中之溶液洗滌有機相二次，然後以氯化鈉(47.2 kg)於水(130 kg)中之溶液洗滌二次。然後在≤  -0.08 MPa的條件下濃縮至150至200 L的體積，同時維持溫度低於45℃。將所得混合物調整到20℃至30℃之後，添加三級丁基甲基醚(123 kg，166 L, 2.5體積)及正庚烷(112 kg，163 L，2.5體積)。通過矽膠管柱(112 kg之矽膠)過濾所得混合物，直到幾乎所有材料都已過濾。然後以三級丁基甲基醚(481 kg，10體積)及正庚烷(444 kg，10體積)在20℃至30℃沖洗反應器，並且此沖洗液也通過矽膠管柱過濾。通過包含矽膠(40 kg)之新鮮管柱洗提合併的濾液，並且洗提液在≤ -0.08 MPa下濃縮至體積為80至100 L，同時溫度維持在低於45℃。將所得溶液調整到20℃至30℃，給予包含D2 之黃色溶液。產量：104.3 kg之溶液，包含D2 (52.64 kg，221.8 mol，80%)。HPLC純度：83% (HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：於水中之10 mM乙酸銨；移動相B：乙腈；梯度：在10分鐘期間20%至95% B；流速：1.0 mL/分鐘)。D2 之滯留時間：7.34分鐘。1 H NMR (401 MHz, 氯仿-d ) δ 7.37 – 7.22 (m, 5H), 5.10 (br ddd,J = 54.8, 5, 5 Hz, 1H), 4.03 (d,J = 13.0 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.59 (d,J = 13.0 Hz, 1H), 3.34 – 3.21 (m, 2H), 2.65 – 2.42 (m, 2H), 2.29 (br ddd,J = 29.8, 14.8, 6.3 Hz, 1H)。步驟 3. [(2 S,4 S)-1- 苄基 -4- 氟吡咯啶 -2- 基 ] 甲醇 (D3 ) 之合成。
在15℃至25℃，在氮下，將四氫呋喃(352 kg)添加到氫化鋁鋰(8.20 kg，216 mol)。在完成添加之後，攪拌混合物10至15分鐘，並將氮從反應器的下部鼓泡3至5分鐘。將混合物調整到8℃至15℃，然後以參考速度為35至45 kg/小時在8℃至15℃分次添加D2 於四氫呋喃中之溶液(99.10 kg，包含50.02 kg，210.8 mol之D2 )。加入三分之一的基質之後，攪拌反應混合物0.5至1小時，然後取樣分析。不添加額外材料直到剩餘≤10%之D2 填充物。完成整個D2 添加後，在8℃至15℃使反應進行；1小時之後，每1至3小時取樣用於HPLC分析，直到觀察到≤2%之D2 (HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：於水中之10 mM乙酸銨；移動相B：乙腈；梯度：在10分鐘期間20%至95% B；流速：1.0 mL/分鐘)。D2 之典型滯留時間：7.5分鐘。
然後通過添加水(8.00 kg)和四氫呋喃(44.5 kg)的混合物淬滅反應；在0℃至20℃以參考速度為6至8 kg/小時添加此。然後在10℃至25℃，以參考速度為10至20 kg/小時將氫氧化鈉(1.40 kg，35 mol)於水 (30.0 kg)中之溶液填充到混合物。此添加完成之後，攪拌混合物0.5至1小時。在15℃至25℃下將氮從反應器的下部鼓泡混合物4至6小時。過濾混合物，並將所收集之固體與四氫呋喃(317 kg)在15℃至25℃下攪拌1至2小時；然後過濾此混合物。將合併之濾液在≤ -0.08 MPa下濃縮至1至1.2體積，同時溫度維持在低於45℃。將2-甲基四氫呋喃(388 kg)分次填充到混合物中，同時溫度維持在低於45℃。每次添加之後，攪拌到5至10分鐘，然後如上濃縮至1至1.2體積。進行取樣以確保殘餘之四氫呋喃為≤2%，且水含量(藉由Karl Fischer分析)為≤0.1%。將所得混合物調整至15℃至25℃並以2-甲基四氫呋喃(43.0 kg)處理；攪拌提供包含D3之黃色溶液。產量：102.7 kg之溶液，包含D3 (41.05 kg，196.2 mmol，93%)。HPLC純度：90% (HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：於水中之10 mM乙酸銨；移動相B：乙腈；梯度：在10分鐘期間20%至95% B；流速：1.0 mL/分鐘)。D3 之滯留時間：5.38分鐘。1 H NMR (401 MHz, 氯仿-d ), 特徵峰：δ 7.37 - 7.23 (m, 5H), 5.05 (br ddd,J = 54.5, 4.7, 4.5 Hz, 1H), 4.04 (d,J = 13.3 Hz, 1H), 3.54 - 3.45 (m, 1H), 3.33 (d,J = 13.3 Hz, 1H), 3.23 (br dd,J = 18.5, 11.7 Hz, 1H), 2.83 - 2.75 (m, 1H), 2.63 (br d,J = 9.2 Hz, 1H), 2.49 - 2.10 (m, 3H)。步驟 4. (3 R,5 S)-1- 苄基 -5- 氟哌啶 -3- 醇 (D4 ) 之合成。
在15℃至25℃下將D3 於2-甲基四氫呋喃中之溶液(102.6 kg，包含41.03 kg，196.1 mol之D3 )添加到2-甲基四氫呋喃(160 kg)。然後以參考速度為35至45 kg/小時加入三氟乙酸酐(42.20 kg，200.9 mol)，接著以參考速度為35至45 kg/小時加入三乙胺 (61.1 kg，604 mol)。將反應混合物維持在15℃至25℃，1小時，然後加熱至77℃至82℃。12小時之後，每1至12小時取樣一次供HPLC分析，直至D3的面積百分比為≤3% (HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：於水中之10 mM乙酸銨；移動相B：乙腈；梯度：在10分鐘期間20%至95% B；流速：1.0 mL/分鐘)。D3 之典型滯留時間：5.8分鐘。
此時，將反應混合物冷卻至10℃至20℃並用氫氧化鈉(3.30 kg，82 mol)於水(41.1 kg)中之溶液以參考速度為34至45 kg/小時處理，同時溫度維持在10℃至30℃之間。在完成添加之後，將混合物攪拌1小時，隨後在15℃至30℃下以氯化鈉(23.1 kg)於水(82.2 kg)中之溶液洗滌。以三級丁基甲基醚(150 kg，203 L，5體積)在15℃至30℃下萃取水層一次，並將合併的有機層在≤ -0.08 MPa濃縮至1至1.2體積，同時溫度維持在低於45℃。將混合物在15℃至30℃下以水(162 kg)洗滌二次，並針對三乙胺在有機相中取樣，以確保三乙胺量為≤3%。然後在≤ -0.08 MPa的條件下濃縮至1至1.2體積，同時溫度維持在低於45℃。添加四氫呋喃(110 kg)，並將所得混合物再次在≤ -0.08 MPa下濃縮至1至1.2體積的量，同時溫度維持在低於45℃。將所得材料冷卻至20℃至30℃，給予包含D4 的深棕色溶液。產量：153.5 kg之溶液，包含D4 (36.50 kg，174.4 mmol，89%)。HPLC純度：85% (HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：於水中之10 mM乙酸銨；移動相B：乙腈；梯度：在10分鐘期間20%至95% B；流速：1.0 mL/分鐘)。D4 之滯留時間：5.88分鐘。1 H NMR (401 MHz, 氯仿-d ) δ 7.36 - 7.23 (m, 5H), 4.84 - 4.66 (m, 1H), 3.90 - 3.81 (m, 1H), 3.62 - 3.59 (m, 2H), 2.92 - 2.76 (m, 2H), 2.69 (dd,J = 11.5, 5.0 Hz, 1H), 2.54 - 2.39 (m, 2H), 2.10 - 1.98 (m, 1H), 1.95 - 1.78 (m, 1H)。步驟 5. 三級丁基 (3 S,5 R)-3- 氟 -5- 羥基哌啶 -1- 羧酸酯 (D5 ) 之合成。
將在四氫呋喃中之D4 (包含30.03 kg，143.5 mol之D4)、四氫呋喃(218 kg)，及重碳酸二-三級丁酯(47.10 kg，215.8 mol)之混合物，在15℃至30℃下，通過地下管道用氮沖吹至0.2至0.3 MPa，然後排氣至0.02至0.05 MPa。重複此沖吹和排氣程序5至8次。在15℃至30℃將木炭上之鈀(10%，3.00 kg)填充到反應器中，然後以水(0.26 kg)沖洗固體添加漏斗。通過地下管道以氮將反應混合物沖吹至0.1至0.2 MPa，然後在15℃至30℃時排氣至0.02至0.05 MPa；此沖吹和排氣程序重複5至8次。然後使用氫執行相同的沖吹-排氣規程。最後氫交換之後，以氫將壓力增加至0.1至0.2 MPa。然後每1至3小時以氮交換反應混合物二次，並通過地下管道將氫沖吹至0.1至0.2 MPa，接著排氣至0.02至0.05 MPa。交換後，將氫壓力增加至0.1至0.2 MPa，並將反應混合物維持在20℃至30℃。8小時後，每1至12小時對反應取樣用於HPLC分析，直到D4 量為≤1.0% (HPLC條件.管柱：Waters XSelect 苯基-己基, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：包含0.1%三氟乙酸之水；移動相B：包含0.1%三氟乙酸之乙腈；梯度：在15分鐘期間5%至35% B；流速：1.0 mL/分鐘)。 然後將其通過地下管道用氮沖吹至0.2到0.3 MPa，並在15到30℃下排氣到0.02到0.05 MPa；重複此循環不少於9次。在20℃至30℃下，將反應混合物通過不鏽鋼吸濾器，並用四氫呋喃(26.6 kg，29.9 L，1體積)沖洗濾餅；將合併的濾液通過裝載有矽膠(15.1 kg)的濾器，然後將氧化矽濾餅用四氫呋喃(52.7 kg，59.3 L，2體積)沖洗。將合併的濾液在15℃至30℃下通過在線濾器且在≤-0.08 MPa的條件下濃縮至1.1至1.4體積的量，同時溫度維持在低於45℃。以正庚烷(102 kg)在15℃至45℃下處理所得混合物，並攪拌10分鐘，隨之取樣混合物以確保殘餘的四氫呋喃為＜8%。在15℃至45℃下加入四氫呋喃(6.90 kg)和正庚烷(101 kg)，且將混合物加熱至50℃至55℃，然後冷卻至18℃至25℃並攪拌1小時。將D5的晶種(0.06 kg；參見以下來源)填裝到混合物，然後攪拌1至2小時，同時將溫度維持在18至25℃。在15℃至20℃繼續攪拌8至12小時以結晶。每2到3小時從反應器下部鼓泡氮，以進行濃縮。然後使用不鏽鋼吸濾器過濾混合物；濾餅以正庚烷 (20.4 kg)及四氫呋喃 (0.81 kg) 的混合物沖洗，然後在20℃至30℃下乾燥直至取樣表示殘餘的四氫呋喃≤720 ppm和殘餘的正庚烷≤5000 ppm。獲得呈灰白固體之產物D5。藉由檢定，產量：12.15 kg，97.5%；校正重量：11.84 kg，54.00 mol。來自母液回收的額外材料：5.17 kg，23.6 mmol。合併產量：54%。HPLC純度：94%(HPLC條件.管柱：Waters XSelect 苯基-己基，4.6 x 150 mm，3.5 µm；移動相A：包含0.1%三氟乙酸之水；移動相B：包含0.1%三氟乙酸之乙腈；梯度：在15分鐘期間5%至35% B；流速：1.0 mL/分鐘)。D5 之滯留時間：12.58分鐘。1 H NMR (401 MHz, 氯仿-d ) δ 4.69 (br d,J HF = 47.2 Hz, 1H), 3.86 - 3.76 (m, 1H), 3.62 - 3.35 (m, 3H), 2.64 - 2.44 (m, 1H), 2.18 - 1.92 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)。
製備D5 的晶種：如上所述進行D4 的較小規模的氫化反應；在除去碳上鈀後，將所得之D5 在四氫呋喃中之溶液濃縮至大約1至1.2體積(基於所用的D4量)。將所得混合物以四氫呋喃(0.2體積)和正庚烷(15體積)處理，加熱至50℃至55℃，然後冷卻至15℃至20℃。 將懸浮液攪拌6至8小時後，過濾以給予呈固體之D5 ；此材料用作為晶種。步驟 6. 三級丁基 (3 S,5 R)-3- 氟 -5-[( 甲基磺醯基 ) 氧基 ] 哌啶 -1- 羧酸酯 (D6 ) 之合成。
在15℃至25℃將二氯甲烷 (229 kg)填充到反應器，接著D5 (17.40 kg；從檢定結果校正為：16.96 kg，77.35 mol)；然後從下部鼓泡氮。在15℃至25℃添加三乙胺(9.80 kg，96.8 mol)，隨之將反應混合物冷卻至0℃至5℃。在將混合物維持在0℃至10℃的同時，將甲烷磺醯基氯(10.18 kg，88.88 mol)添加，並使反應在0℃至10℃進行。1小時後，每1至3小時取樣，直到D5 的面積百分比為低於1%(HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：於水中之10 mM乙酸銨；移動相B：乙腈；梯度：在10分鐘期間30%至95% B；流速：1.0 mL/分鐘)。D5 之典型滯留時間：4.31分鐘。 此時，將水(52.0 kg)在0℃至5℃以參考速度為20至38 kg/小時填充到混合物中。在0℃至10℃下，以二氯甲烷(70.4 kg，53.1 L，3體積)萃取所得混合物的水相，且將合併有機層以氯化鈉(4.30 kg)於水 (17.4 kg)中之溶液在0℃至15℃洗滌，隨後在≤ -0.09 MPa下濃縮至2至3體積，同時溫度維持在低於30℃。在0℃至30℃下殘質以三級丁基甲基醚(128 kg)分次稀釋，然後將混合物在≤-0.09 MPa濃縮至2至3體積，同時溫度維持在低於30℃。在0℃至30℃下再次逐次將三級丁基甲基醚(65.0kg)填充到混合物，並在≤-0.09 MPa下再次濃縮混合物至2至3體積，同時溫度維持在低於30℃。重複此規程，直到對二氯甲烷的分析提供殘餘二氯甲烷量為≤2%。然後將混合物加熱至35℃至40℃，並以參考速度為40至60 kg/小時添加正庚烷(116 kg)，隨之以參考速度為10℃至15℃/小時將混合物緩慢冷卻至0℃至10℃。然後在0℃至10℃下攪拌2小時。過濾提供濾餅，將其以正庚烷 (22.5 kg)沖洗，然後在氮氣流下於35℃至40℃乾燥。將所得固體與三級丁基甲基醚 (59.4 kg)在15℃至30℃混合，然後加熱至35℃至40℃。在35℃至40℃下以參考速度為40至60 kg/小時添加正庚烷(119 kg)，並將所得混合物以參考速度為10℃至15℃/小時緩慢冷卻至0℃至10℃。在0℃至10℃下攪拌混合物2小時後，過濾，並以正庚烷(23.6 kg)沖洗濾餅。將所收集之固體在35℃至40℃下乾燥直至殘餘的三級甲基甲基醚為≤5000 ppm，殘餘的正庚烷為≤5000ppm，且Karl Fischer分析顯示水含量≤0.1%。將所得材料冷卻至15℃至30℃，給予呈白色固體之D6 。藉由檢定，產量：19.35 kg，98.3%；校正之重量：19.02 kg，63.97 mol，83%。HPLC純度：99% (HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：於水中之10 mM乙酸銨；移動相B：乙腈；梯度：在10分鐘期間30%至95% B；流速：1.0 mL/分鐘)。D6 之滯留時間：4.98分鐘。1 H NMR (401 MHz, 氯仿-d ) δ 4.79 – 4.52 (m, 2H), 3.72 – 3.53 (m, 4H), 3.06 (s, 3H), 2.36 – 2.11 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)。步驟 7. 三級丁基 (3 S,5 S)-3- 疊氮基 -5- 氟哌啶 -1- 羧酸酯 (D7 ) 之合成。
將N,N -二甲基甲醯胺 (174 kg)和D6(18.45 kg；針對檢定校正18.14 kg，61.01 mol))填充到反應器中，並在15℃至30℃攪拌直到得到溶液，隨之疊氮化鈉(6.05 kg，93.1 mol)在15℃至30℃下添加。將反應混合物以參考速度為20℃至35℃/小時加熱至78℃至88℃，然後使其在78℃至88℃下反應。6至12小時之後，每2至8小時對反應混合物取樣供HPLC分析，直到D6 的面積百分比小於0.5% (HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：包含0.1%乙酸銨之水；移動相B：乙腈；梯度：在10分鐘期間20%至95% B；流速：1.0 mL/分鐘)。D6 之典型滯留時間：6.4分鐘。
將混合物冷卻至10℃至20℃後，以參考速度為35至85 kg /小時添加三級丁基甲基醚(68.7 kg)和水(185 kg)，並繼續攪拌10至20分鐘。過濾混合物，並以三級丁基甲基醚(2 x 69 kg，93 L，5體積)萃取濾液的水層。將合併的有機層以水(2 x 56 kg，56 L，3體積)洗滌以給予呈在三級丁基甲基醚中的淺黃色溶液之D7 。產量：185.4 kg；於三級丁基甲基醚中之溶液，假設包含14.90 kg，61.01 mol之D7 ，100%。HPLC純度：80% (HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：包含0.1%乙酸銨之水；移動相B：乙腈；梯度：在10分鐘期間20%至95% B；流速：1.0 mL/分鐘)。D7 之滯留時間：8.37分鐘。步驟 8. 三級丁基 (3 S,5 S)-3- 胺基 -5- 氟哌啶 -1- 羧酸酯 (P3 ) 之合成。
在15℃至30℃將甲醇(30.2 kg)和D7 (來自先前步驟的185.4 kg之三級丁基甲基醚溶液；假設包含61.01 mmolD7 )填充到反應器中。通過地下管道將氮沖吹混合物至0.2至0.3 MPa，然後排氣至0.02至0.05 MPa；此沖吹/排氣操作進行5至8次，直到氧含量低於1.0%。木炭上之鈀(10%，0.95 kg)在15℃至30℃下添加，隨之以水(0.15 kg)沖洗添加漏斗。在15℃至30℃將所得混合物經地下管道用氮沖吹至0.2至0.3 MPa，然後排氣至0.02至0.05 MPa。重複此沖吹/排氣步驟不少於9次。然後進行相同程序5至8次，除了使用氫代替氮。然後通過地下管道以氫將反應混合物沖吹至0.1至0.2 MPa，並使之在20℃至30℃下反應。氫按以下方式每1至3小時交換二次：通過地下管道以氫沖吹混合物至0.1至0.2 MPa，然後排氣至0.02至0.05 MPa，且最後以氫沖吹至0.1至0.2 MPa。在20℃至30℃下6至12小時之後，每3至12小時對反應混合物取樣供HPLC分析，直到D7 的面積百分比為≤1.0% (HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：包含0.1%乙酸銨之水；移動相B：乙腈；梯度：在10分鐘期間20%至95% B；流速：1.0 mL/分鐘)。D7 之典型滯留時間：8.6分鐘。
然後將反應混合物用氮氣沖吹至0.2至0.3MPa，並在15℃至30℃排氣至0.02至0.05MPa。沖吹/排氣程序進行了不少於9次。在20℃至30℃過濾，然後用三級丁基甲基醚(30.0 kg，40.5 L，相對於D6 為2體積)沖洗濾餅，提供濾液，將其在-0.08 MPa下濃縮至20至30 L之體積，同時溫度維持在低於40℃。在15℃至30℃下添加正庚烷(25.0 kg)，並以相同方式濃縮至19至30 L的體積。再次添加正庚烷(25.0 kg)，並以相同方式進行濃縮至35至40 L的體積；將其加熱至40℃至50℃，在該溫度下攪拌1至2小時，並在48℃至53℃下過濾。將所收集之固體在氮氣流下於35℃至45℃乾燥。6至12小時之後，每2至12小時對材料取樣以供分析，直到殘餘之三級丁基甲基醚為≤5000 ppm，殘餘之正庚烷為≤5000 ppm，及殘餘之甲醇為≤3000 ppm。然後將固體冷卻至15℃至30℃，過篩直至產品外觀均勻，並在20℃至30℃下溶解於二氯甲烷(187 kg)。將其攪拌1至2小時之後，過濾，並將有機層在-0.08 MPa下濃縮至25至35 L之體積，同時溫度維持在低於40℃。將所得化合物以正庚烷(3體積)稀釋，且濃縮至18至22 L(大約3體積)之體積；此操作重複共3次，從而交換正庚烷為二氯甲烷。在20℃至30℃下使所得混合物攪拌並結晶；然後過濾單離呈灰白固體之P3 。藉由檢定，產量：5.60 kg，98%；在2步驟期間，校正之重量：5.48 kg，25.1 mol，41%。HPLC純度：99% (HPLC條件.管柱：Waters XBridge BEH C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm；移動相A：包含0.1%乙酸銨之水；移動相B：乙腈；梯度：在10分鐘期間20%至95% B；流速：1.0 mL/分鐘)。P3 之滯留時間：4.93分鐘。1 H NMR (401 MHz, 氯仿-d ), 特徵峰：δ 4.78 (br d,J HF = 46.7 Hz, 1H), 4.27 – 3.91 (m, 2H), 3.21 – 3.11 (m, 1H), 3.02 – 2.84 (m, 1H), 2.62 – 2.35 (m, 1H), 2.29 – 2.17 (m, 1H), 1.44 (s, 9H)。 製備 P4 2-(5-((3-( 乙氧基 -d5 ) 吡啶 -2- 基 ) 氧基 ) 吡啶 -3- 基 ) 嘧啶 -5- 羧酸 (P4 )
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Figure 02_image029
步驟 1. 3-( 乙氧基 -d5 ) 吡啶之合成
反應以二平行批次進行；例示批次製備如下：在25℃下將三正丁基膦(8.40 mL，33.6 mmol，2.0當量)添加到3-羥基吡啶(1600 mg，16.8 mmol，1.0 equiv.)及乙醇-d6 (1.18 mL，20.2 mmol，1.2 equiv.)於四氫呋喃 (60 mL)中之溶液。然後添加1,1’-(偶氮基二羰基)二哌啶(8490 mg，33.6 mmol，2.0 equiv.)，且將黃色溶液在40℃下攪拌16小時。過濾反應混合物，並向濾液中添加水(50 mL)並以乙酸乙酯(2x50 mL)萃取混合物。以鹽水(50 mL)洗滌有機層，以硫酸鈉乾燥、過濾並濃縮以給予粗產物。將粗產物藉由矽膠管柱 層析法(ISCO 80 g，在石油醚中之3% EtOAc)純化以給出呈黃色油狀物之標題化合物。合併的批次產量為3.70克(86%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 8.29 (d,J = 2.5 Hz, 1H), 8.19 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 7.12-7.24 (m, 2H)。步驟 2. 3-( 乙氧基 -d5 ) 吡啶 -1- 氧化物之合成
在0℃下間氯過氧苯甲酸(7620 mg，37.5 mmol，1.3當量)添加到3-(乙氧基-d5 )吡啶(3700 mg，28.9 mmol，1.0 equiv.)於二氯甲烷 (150 mL)中之溶液。在15℃下攪拌反應混合物3天。添加水性硫代硫酸鈉(100 mL)。在15℃攪拌反應混合物0.5小時。將混合物以二氯甲烷(100 mL)萃取。以硫酸鈉乾燥有機層、過濾並濃縮以給予粗產物。將該粗產物藉由矽膠管柱層析法(二氯甲烷–10：1 二氯甲烷：甲醇)純化，以給出呈紅色固體之標題化合物(2500.0 mg，60.1%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ ppm 7.93-8.00 (m, 1H), 7.86-7.92 (m, 1H), 7.15 (dd,J = 8.6, 6.4 Hz, 1H), 6.87 (ddd,J = 8.6, 2.2, 0.7 Hz, 1H)。步驟 3. 2-((5- 溴吡啶 -3- 基 ) 氧基 )-3-( 乙氧基 -d5 ) 吡啶之合成
在0℃下將二異丙基乙基胺 (11.3 mL，65.0 mmol，3.75 equiv.)及溴三吡咯啶并鏻六氟磷酸鹽(10.5 g，22.5 mmol，(1.3 equiv.)添加到3-(乙氧基-d5 )吡啶-1-氧化物 (2500 mg，17.3 mmol，1.0 equiv.)及3-溴-5-羥基吡啶 (3020 mg，17.3 mmol，1.0 equiv.)於四氫呋喃(60 mL)中之攪拌溶液。在15℃下攪拌反應混合物18小時。將反應混合物濃縮至乾，並溶解於二氯甲烷 (150 mL)。將有機層以1N 氫氧化鈉(150 mL)、水 (100 mL)、及鹽水(100 mL)洗滌。將有機層以硫酸鈉乾燥、過濾並濃縮，以給出油狀物。將原油用矽膠管柱層析法(石油醚–80：20石油醚：乙酸乙酯)純化以給出呈白色固體之產物(3600.0 mg，69.2%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ ppm 8.48 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 8.44 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.65-7.74 (m, 2H), 7.19-7.29 (m, 1H), 7.03 (dd,J = 7.9, 4.9 Hz, 1H)。步驟 4. (5-((3-( 乙氧基 -d5 ) 吡啶 -2- 基 ) 氧基 ) 吡啶 -3- 基 ) 硼酸之合成
將雙聯硼酸頻哪醇酯(bis(pinacolato) diboron) (3800 mg，15.0 mmol，1.2 equiv.)、乙酸鉀(3670 mg，37.4 mmol，3.0 equiv.)及[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (Pd(dppf)Cl2 ； 456 mg，0.62 mmol，0.05 equiv.)添加到2-((5-溴吡啶-3-基)氧基)-3-(乙氧基-d5 )吡啶 (3740 mg，12.5 mmol，1.0 equiv.)於二㗁烷 (120 mL)中之溶液。將所得化合物除氣並用氮沖吹3次，然後在100℃下於N2 下攪拌2小時。將所得混合物濃縮，並以乙酸乙酯 (200 mL)稀釋殘質及以鹽水(100 mL)洗滌。將有機相以硫酸鈉乾燥、過濾並濃縮至乾，以給出呈棕色油狀物之粗產物(7000.0 mg)，其直接用於下一步驟。MS (ES+) 265.8 (M+H)。步驟 5. 乙基 2-(5-((3-( 乙氧基 -d5 ) 吡啶 -2- 基 ) 氧基 ) 吡啶 -3- 基 ) 嘧啶 -5- 羧酸酯之合成
反應以二平行批次進行；例示批次製備如下：將乙基2-氯嘧啶-5-羧酸酯(1000 mg，5.4 mmol，1.5 equiv.)、碳酸鉀 (980 mg，7.1 mmol，2.0 equiv.)及[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)、二氯甲烷錯合物(130 mg，0.18 mmol，0.05 equiv.)添加到(5-((3-(乙氧基-d5 )吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)硼酸(1880 mg，3.6 mmol，1.0 equiv.)於二㗁烷(25 mL)及水(2.5 mL)中之溶液。將所得混合物用氮沖洗，然後在90℃下攪拌2小時。過濾反應，且濃縮濾液。以乙酸乙酯(200 mL)稀釋殘質及以鹽水(2x100 mL)洗滌。將有機層以硫酸鈉乾燥、過濾並濃縮以給出粗產物。將粗材料藉由矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯；70：30)純化，以給出呈黃色固體之產物。合併批次產生2.3 g (50%)。1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ ppm 9.57 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 9.34 (s, 2H), 8.68 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.61 (dd,J = 2.6, 1.8 Hz, 1H), 7.73 (dd,J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.28-7.28 (m, 1H), 7.04 (dd,J = 8.1, 4.9 Hz, 1H), 7.00-7.08 (m, 1H), 4.48 (q,J = 7.1 Hz, 2H), 1.46 (t,J = 7.1 Hz, 4H)。MS (ES+) 372.1 (M+H)。步驟 6 ： 2-(5-((3-( 乙氧基 -d5 ) 吡啶 -2- 基 ) 氧基 ) 吡啶 -3- 基 ) 嘧啶 -5- 羧酸 (P4 )
反應以二平行批次進行；例示批次製備如下：在15℃下將氫氧化鈉(1080 mg，26.9 mmol，5.0 equiv.)添加到乙基2-(5-((3-(乙氧基-d5 )吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)嘧啶-5-羧酸酯 (2000 mg，5.4 mmol，1.0 equiv.)於四氫呋喃 (70 mL)及水(35 mL)中之溶液。將所得溶液在15℃攪拌1小時。將混合物濃縮以移除四氫呋喃。用4M鹽酸將水性混合物酸化至pH為4，以水 (50 mL)稀釋且在15℃下攪拌20分鐘。將固體過濾、以水 (3x10 mL)洗滌，並乾燥產生呈綠色固體之2-(5-((3-(乙氧基-d5 )吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)嘧啶-5-羧酸。合併批次產生1.28 g (60%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 9.41 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 9.33 (s, 2H) 8.67 (d,J = 2.7 Hz, 1 H), 8.33-8.41 (m, 1H) 7.70 (dd,J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.58 (dd,J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.19 (dd,J = 7.8, 4.9 Hz, 1H)。HRMS (TOF) 344.1402 (M+H)。 實施例 1 2-{5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 R,4 S)-4- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺，雙 ( 三氟乙酸 ) 鹽 (1 )
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Figure 02_image033
步驟 1. 苄基 (3 R,4 S)-3-[( 三級丁氧基 羰基 ) 胺基 ]-4- 氟哌啶 -1- 羧酸酯 (C9 ) 之合成。
將苄基氯甲酸酯(0.116 mL，0.813 mmol)添加到三級丁基[(3R ,4S )-4-氟哌啶-3-基]胺甲酸酯(150 mg，0.69 mmol)及碳酸鈉(146 mg，1.38 mmol)於四氫呋喃(8 mL)中之0℃混合物，並在25℃攪拌反應混合物3天。然後將其以水(20 mL)處理，並以乙酸乙酯 (2 x 20 mL)萃取。將合併的有機層以飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌、以硫酸鈉乾燥、過濾，並真空濃縮以給予呈無色油狀物之C9 (290 mg)。藉由1 H NMR分析，此材料包含雜質，但無需額外純化即可用於下一步驟。1 H NMR (400 MHz, 氯仿 -d ), 特徵峰：δ 4.95 - 4.76 (m, 2H), 3.87 - 3.68 (m, 1H), 3.12 - 2.99 (m, 1H), 2.11 - 1.96 (m, 1H), 1.45 (s, 9H)。步驟 2. 苄基 (3 R,4 S)-3- 胺基 -4- 氟哌啶 -1- 羧酸酯，鹽酸鹽 (C10 ) 之合成。
在15℃攪拌C9 (來自先前步驟；290 mg，≤0.69 mmol)及氯化氫(在1,4-二㗁烷之4 M溶液；6.0 mL)之混合物1小時，隨之真空濃縮，給予呈白色固體之C10 。產量：200 mg，0.69 mmol，在二步驟期間定量。1 H NMR (400 MHz, 氧化氘) δ 7.48 – 7.33 (m, 5H), 5.14 (s, 2H), 5.11 (br d,J HF = 48 Hz, 1H), 4.11 – 3.94 (m, 1H), 3.88 – 3.28 (m, 4H), 2.14 – 2.01 (m, 1H), 2.01 – 1.81 (m, 1H)。步驟 3. 苄基 (3 R,4 S)-3-{[(2-{5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 } 嘧啶 -5- 基 ) 羰基 ] 胺基 }-4- 氟哌啶 -1- 羧酸酯 (C11 ) 之合成。
向P2 (50.0 mg，0.140 mmol)於N ,N -二甲基乙醯胺(3.0 mL)中之25℃溶液添加C10 (48.6 mg，0.168 mmol)、三乙胺(58.7 µL，0.421 mmol)、及2-氯-1,3-二甲基-4,5-二氫-1H -咪唑-3-鎓氯化物(71.2 mg，0.421 mmol)。將反應混合物在50℃下攪拌1小時之後，以水(20 mL)稀釋並以乙酸乙酯(20 mL)萃取。將有機層以飽和氯化鈉水溶液(20 mL)洗滌、以硫酸鈉乾燥、過濾、並以真空濃縮。在矽膠上之層析法(洗提液：9：1乙酸乙酯/石油醚)提供呈黃色固體之C11 。產量：80.0 mg，0.135 mmol，96%。LCMSm/z 591.2 [M+H]+ 。步驟 4. 2-{5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 R,4 S)-4- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺，雙 ( 三氟乙酸 ) 鹽 (1 ) 之合成。
10%碳上鈀 (60.0 mg)添加到C11( 60.0 mg，0.102 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液，隨之將混合物在真空下脫氣，然後用氫沖吹；此抽空沖吹循環進行共3次。然後將反應混合物在氫氣球下於25℃攪拌2小時，此時與使用C11 (20.0 mg，33.9 µmol) 進行的類似反應合併並過濾。真空濃縮濾液及使用逆相HPLC (管柱：Agela Durashell C18, 5 µm；移動相A：於水中之0.1%三氟乙酸；移動相B：乙腈；梯度：14%至44% B) 純化以給予呈黃色膠狀物之2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3R ,4S )-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺，雙(三氟乙酸)鹽。合併產量：28.1 mg，41.1 µmol，30%。LCMSm/z 457.4 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ), 特徵峰：δ 9.52 (br s, 1H), 9.16 (br s, 2H), 8.80 (s, 1H), 8.78 – 8.57 (m, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.06 (dd,J = 9.2, 2.3 Hz, 1H), 4.99 (br d,J HF = 50 Hz, 1H), 4.91 – 4.70 (m, 1H), 4.12 (q,J = 6.9 Hz, 2H), 2.41 – 2.09 (m, 2H), 1.48 (t,J = 6.9 Hz, 3H)。 實施例 2 2-{5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 S,5 S)-5- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺 (2 )
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步驟 1. 三級丁基 (3 S,5 S)-3-{[(2-{5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 } 嘧啶 -5- 基 ) 羰基 ] 胺基 }-5- 氟哌啶 -1- 羧酸酯 (C12 ) 之合成。
將N,N -二異丙基乙基胺(2.79 mL，16.0 mmol)及P3 (500 mg，2.29 mmol)加入P2 (816 mg，2.29 mmol)於N,N -二甲基甲醯胺(10 mL)中之室溫溶液。將所得溶液冷卻至0℃之後，添加2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三膦烷2,4,6-三氧化物(T3P；於乙酸乙酯中之50%溶液；1.6 mL，2.7 mmol)，並使反應混合物在室溫下攪拌2小時。此時的LCMS分析表示存在C12 ：LCMSm/z 557.4 [M+H]+ 。反應混合物在水和乙酸乙酯之間分配，並用乙酸乙酯萃取水層二次。 將合併的有機層用水洗滌二次，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌一次，並用飽和氯化鈉水溶液洗滌一次，然後以硫酸鈉乾燥，過濾，並真空濃縮以提供呈黃色固體之C12 。產量：1.00 g，1.80 mmol，79%。步驟 2. 2-{5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 S,5 S)-5- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺 (2 ) 之合成。
將對甲苯磺酸單水合物(684 mg，3.60 mmol)添加到C12 (1.00 g，1.80 mmol) 於乙酸乙酯(10 mL)中之溶液，並在室溫下使混合物攪拌，直到得到溶液。將反應混合物在回流下攪拌2小時之後，然後在室溫下攪拌2小時，從所得膠傾析出溶劑，並用乙酸乙酯將膠狀體研製四次，並用庚烷研製二次。將所獲得固體在乙酸乙酯和1 M氫氧化鈉水溶液之間分配，並用乙酸乙酯萃取水層四次；將合併的有機層經硫酸鎂乾燥，過濾，並以真空濃縮。將所得材料在回流下溶解於乙酸乙酯 (大約70 mL)，並用庚烷(300 mL)處理，直到混合物變得略微渾濁，隨之使混合物冷卻至室溫並攪拌過夜。過濾，接著用1：1乙酸乙酯 / 庚烷洗滌濾餅，給予呈白色固體之2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺。產量：580 mg，1.27 mmol，71%。LCMSm/z 457.2 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.38 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 9.26 (s, 2H), 8.63 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.59 (br d,J = 7.8 Hz, 1H), 8.35 (dd,J = 2.7, 1.7 Hz, 1H), 7.71 (d, AB四重峰之一半,J = 2.7 Hz, 1H), 7.68 (dd, ABX系統之組分,J = 9.8, 2.7 Hz, 1H), 4.82 (br d,J HF = 48 Hz, 1H), 4.20 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 4.18 - 4.08 (m, 1H), 3.02 - 2.86 (m, 2H), 2.77 - 2.62 (m, 1H), 2.5 - 2.43 (m, 1H, 假設值；被溶劑峰部分遮蓋), 2.19 - 2.08 (m, 1H), 1.91 - 1.72 (m, 1H), 1.37 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。 實施例 3 2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 R,4 S)-4- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺，雙 ( 三氟乙酸 ) 鹽 (3 )
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步驟 1. 苄基 (3 R,4 S)-3-{[(2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 } 嘧啶 -5- 基 ) 羰基 ] 胺基 }-4- 氟哌啶 -1- 羧酸酯 (C13 ) 之合成。
對P1 (50.0 mg，0.148 mmol)於N ,N -二甲基乙醯胺(3.0 mL)中之25℃溶液添加C10 (51.2 mg，0.177 mmol)、2-氯-1,3-二甲基-4,5-二氫-1H -咪唑-3-鎓氯化物(75.0 mg，0.444 mmol)、及三乙胺(61.8 µL，0.443 mmol)。在50℃攪拌反應混合物1小時，隨之添加水(20 mL)，並將所得混合物以乙酸乙酯(20 mL)萃取。以飽和氯化鈉水溶液(20 mL)洗滌有機層，以硫酸鈉乾燥，過濾，真空濃縮，並經過矽膠層析法(洗提液：4：1乙酸乙酯/石油醚)，得到呈黃色固體之C13 。產量：80.0 mg，0.140 mmol，95%。LCMSm/z 573.2 [M+H]+ 。步驟 2. 2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 R,4 S)-4- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺，雙 ( 三氟乙酸 ) 鹽 (3 ) 之合成。
對C13 (60.0 mg，0.105 mmol)於四氫呋喃 (10 mL)中之溶液添加10%/碳上鈀(60.0 mg)，隨之將混合物在真空下脫氣，然後用氫沖吹；此抽空沖吹循環進行共3次。將反應混合物在氫氣球下於25℃攪拌5小時，然後與使用C13 (20.0 mg，34.9 µmol)進行的類似反應合併。進行過濾此混合物之後，真空濃縮濾液，及使用逆相HPLC純化(管柱：YMC-Actus Triart C18, 5 µm；移動相A：包含0.05%氫氧化銨的水；移動相B：乙腈；梯度：24%至64% B)。獲得呈白色固體之游離鹼2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3R ,4S )-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺。游離鹼2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3R ,4S )-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺之合併產率：12 mg，27 µmol，19%。LCMSm/z 439.1 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 9.52 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 9.17 (s, 2H), 8.65 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.58 – 8.54 (m, 1H), 7.70 (dd,J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.27 – 7.23 (m, 1H, 假設值；被溶劑峰部分遮蓋), 7.02 (dd,J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 6.68 (br d,J = 8.8 Hz, 1H), 4.93 (br d,J HF = 49 Hz, 1H), 4.48 – 4.31 (m, 1H), 4.18 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.10 (dd,J = 12.1, 4.5 Hz, 1H), 3.00 – 2.80 (m, 3H), 2.15 – 2.01 (m, 1H), 1.97 – 1.77 (m, 1H), 1.50 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。
將游離鹼2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3R ,4S )-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺 (12 mg，27 µmol)溶解於三氟乙酸(於水中之0.1%三氟乙酸；12 mL)之水溶液，然後凍乾16小時以提供呈黃色膠狀物之2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3R ,4S )-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺，雙(三氟乙酸)鹽。2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3R ,4S )-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺，雙(三氟乙酸)鹽之合併產率：12.9 mg，19.4 µmol，14%。LCMSm/z 439.4 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 10.56 – 10.28 (br s, 1H), 9.80 – 9.55 (br s, 1H), 9.71 (s, 1H), 9.24 (s, 2H), 9.09 (br s, 1H), 8.86 (br d,J = 7.9 Hz, 1H), 8.77 (d,J = 2.5 Hz, 1H), 7.72 (dd,J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.32 (dd,J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.14 (dd,J = 8.0, 4.9 Hz, 1H), 4.97 (br d,J HF = 49 Hz, 1H), 4.96 – 4.78 (m, 1H), 4.18 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.83 – 3.72 (m, 1H), 3.5 – 3.2 (m, 3H), 2.42 – 2.11 (m, 2H), 1.50 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。 實施例 4 2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 S,5 S)-5- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺 (4 )
Figure 02_image039
步驟 1. 三級丁基 (3 S,5 S)-3-{[(2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 } 嘧啶 -5- 基 ) 羰基 ] 胺基 }-5- 氟哌啶 -1- 羧酸酯 (C14 ) 之合成。
將N,N -二異丙基乙基胺 (53.1 mL，305 mmol)及P3 (9.50 g，43.5 mmol)添加到P1 (14.7 g，43.4 mmol)於乙腈(210 mL)中之溶液。將混合物冷卻至0℃，然後通過注射器在大約4分鐘期間添加2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三膦烷2,4,6-三氧化物(T3P；於乙酸乙酯中之50%溶液；30.5 mL，51.2 mmol)。在0℃將反應混合物攪拌45分鐘後，移開冰浴，並使反應混合物達到室溫且攪拌17小時。然後將其真空濃縮，將殘質分配在水和乙酸乙酯之間，並以乙酸乙酯萃取水層二次。依序以飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌合併的有機層；通過過濾除去在飽和水性氯化鈉洗滌過程中出現的沉澱物並丟棄。飽和氯化鈉水層以乙酸乙酯萃取，並將合併的有機層真空濃縮。將殘質溶解於二氯甲烷和甲醇的混合物中，並預先吸附到矽膠上。進行矽膠層析法(梯度：在庚烷中30%至100%乙酸乙酯)，並觀察到產物在乙酸乙酯/庚烷洗提液中的溶解度有限。此純化給予呈灰白固體之C14 。產量：19.1 g，35.5 mmol，82%。LCMSm/z 539.3 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 9.48 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 9.12 (s, 2H), 8.63 (d,J = 2.6 Hz, 1H), 8.55 (dd,J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.70 (dd,J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.26 (dd,J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.03 (dd,J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 6.97 – 6.37 (v br m, 1H), 4.78 (br d,J HF = 46.7 Hz, 1H), 4.46 – 4.33 (m, 1H), 4.18 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 4.08 – 3.05 (v br m, 4H), 2.41 – 2.11 (m, 1H), 2.02 – 1.79 (m, 1H), 1.49 (t,J = 7.0 Hz, 3H), 1.49 (s, 9H)。步驟 2. 2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 S,5 S)-5- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺 (4 ) 之合成。
將氯化氫於1,4-二㗁烷(4 M；520 mL，2.1 mol)中之溶液在10分鐘期間添加到C14 (159 g，295 mmol)於四氫呋喃(850 mL)中之室溫溶液；反應溫度從35℃增加到40℃，並用加熱罩維持此溫度。添加完成之後，在35℃至40℃下攪拌反應混合物3小時。LCMS分析顯示剩餘20%的起始材料，因此再次將氯化氫於1,4-二㗁烷(4 M；150 mL，600 mmol)中之溶液添加到反應混合物，並在35℃至40℃繼續攪拌30分鐘。在此時，通過LCMS分析剩餘5%的起始材料，並以氯化氫於1,4-二㗁烷(4 M；60 mL，240 mmol) 中之溶液處理反應混合物。在35℃至40℃下額外45分鐘之後，將反應混合物真空濃縮，並將所得固體溶解於水(1 L)。此溶液以氫氧化鈉水溶液(1 M；900 mL，900 mmol)處理，然後以水(400 mL)稀釋以協助攪拌；在室溫下15分鐘之後，通過過濾收集沉澱物，並以水(4 x 250 mL)洗滌。藉由添加水使此固體到達總體積為800 mL，然後使用頂置攪拌器在室溫下與甲醇(800 mL)漿化2小時。將漿液過濾，並以甲醇及水(1：1，1L) 的混合物洗滌濾餅。將此固體與使用C14 (≤946 mmol)進行的幾次相似反應的產物合併；將合併的批次懸浮在乙酸乙酯(1.1 L)中，並在室溫下使用機械攪拌器攪拌1小時。通過過濾收集固體之後，將其以乙酸乙酯洗滌以給予呈灰白固體之2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺。依據如下針對甲苯磺酸酯鹽型態所述的單晶體X射線結晶學，建立4的結構。產量：330 g，753 mmol，在2步驟期間61%。LCMSm/z 439.3 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.38 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 9.26 (s, 2H), 8.64 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.60 (br d,J = 7.9 Hz, 1H), 8.36 (dd,J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.68 (dd,J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.56 (dd,J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.17 (dd,J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 4.81 (br d,J HF = 48.3 Hz, 1H), 4.22 – 4.07 (m, 1H), 4.17 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.02 – 2.86 (m, 2H), 2.69 (br dd,J = 35.1, 14.2 Hz, 1H), 2.5 – 2.38 (m, 2H, 假設值；被溶劑峰部分遮蓋), 2.19 – 2.07 (m, 1H), 1.91 – 1.72 (m, 1H), 1.37 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。
粉末x射線繞射分析是使用配備有Cu輻射源(K-α平均值)的Bruker AXS D8 Endeavor繞射儀對此實施例的固體進行。發散狹縫設置在15mm連續照明下。藉由PSD-Lynx Eye偵測器，偵測器PSD的開口設置為3.00度，偵測繞射輻射。X射線管電壓和安培數分別設定為40 kV和40 mA。使用0.01度的步長和1.0秒的步進時間，在Cu波長為3.0至40.0度2-θ下，在θ-θ測角器中收集數據。抗散射螢幕設置為1.5 mm的固定距離。在收集期間，樣品以15/min旋轉。藉由將樣品放置在矽低背景樣品架中來製備樣品，並在收集期間旋轉樣品。
使用Bruker DIFFRAC Plus軟體收集數據，並藉由EVA diffract plus軟體進行分析。在峰搜索之前未處理PXRD數據檔案。使用EVA軟體中的峰搜索演算法，以閾值為1所選之峰用於進行初步峰分配。為確保有效性，手動進行調整；目測檢查自動分配的輸出，並調整峰位置以達到最大峰。一般選擇相對強度≥ 3%的峰。未選擇未解析或與噪聲一致的峰。在USP中記載來自PXRD的峰位置相關的典型誤差達±0.2° 2θ (USP-941)。在相對峰高度的一些變化是基於晶體尺寸和形態的變化而預期。圖1提供特徵性x射線粉末繞射圖案。來自此圖的PXRD數據將在下面進一步描述。
Figure 02_image041
Figure 02_image043
實施例 4 ，鹽酸鹽 2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 S,5 S)-5- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺，鹽酸鹽 (4 ，鹽酸鹽 )
Figure 02_image045
Figure 02_image047
將2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺(4.0 g，9.1 mmol)於乙酸乙酯(40 mL)之懸浮液回溫至大約50℃，隨之添加氯化氫於1,4-二㗁烷(4 M；2.5 mL，10 mmol) 中之溶液，且在室溫攪拌反應混合物4天。然後將其過濾，並以溫乙酸乙酯洗滌濾餅二次，給予呈白色固體之2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺，鹽酸鹽。產量：4.1 g，8.6 mmol，94%。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.90 (br d,J = 11 Hz, 1H), 9.39 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 9.35 (s, 2H), 9.26 (br d,J = 7.7 Hz, 1H), 9.24 – 9.10 (m, 1H), 8.65 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 (dd,J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.69 (dd,J = 4.8, 1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd,J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.18 (dd,J = 8.0, 4.9 Hz, 1H), 5.23 (br d,J HF = 45.3 Hz, 1H), 4.54 – 4.40 (m, 1H), 4.18 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.53 – 3.41 (m, 1H), 3.39 – 3.15 (m, 2H), 3.03 – 2.88 (m, 1H), 2.35 – 2.21 (m, 1H), 2.13 – 1.90 (m, 1H), 1.37 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。
使用配備有Cu輻射源的Bruker AXS D4 Endeavor繞射儀，對此實驗的固體進行粉末x射線繞射分析。發散狹縫設置為0.6 mm，而次要光學件使用可變狹縫。藉由PSD-Lynx Eye偵測器偵測繞射輻射。X射線管電壓和安培分別設定為40 kV和40 mA。使用步長為0.020度及步進時間為0.3秒，在Cu波長為3.0到40.0度2-θ的θ-2θ測角器中收集數據。藉由將樣品放置在矽低背景樣品架中來製備樣品，並在收集期間旋轉樣品。使用Bruker DIFFRAC Plus軟體收集數據，並藉由EVA diffract plus軟體進行分析。圖2中提供特徵性x射線粉末繞射圖案。 實施例 4 ，對甲苯磺酸鹽 2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 S,5 S)-5- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺，對甲苯磺酸鹽 (4 ，對甲苯磺酸鹽 )
Figure 02_image049
將2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺(4.0 g，9.1 mmol)於乙酸乙酯(40 mL)中之懸浮液回溫至大約50℃，隨之添加對甲苯磺酸單水合物(1.9 g，10 mmol)，並在室溫下攪拌反應混合物3天。用刮勺將所得的塊狀固體破碎，並在室溫下將懸浮的固體劇烈攪拌1天。過濾提供濾餅，將其以溫乙酸乙酯洗滌二次以提供呈白色固體之2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺，對甲苯磺酸鹽。產量：5.3 g，8.7 mmol，96%。LCMSm/z 439.2 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.40 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 9.28 (s, 2H), 9.24 – 9.03 (br m, 2H), 8.98 (br d,J = 7.6 Hz, 1H), 8.65 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 (dd,J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.68 (dd,J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd,J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.48 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 7.18 (dd,J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 7.11 (d,J = 7.9 Hz, 2H), 5.24 (br d,J HF = 45.1 Hz, 1H), 4.51 – 4.38 (m, 1H), 4.18 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.59 – 3.47 (m, 1H), 3.43 – 3.17 (m, 2H), 2.98 – 2.85 (m, 1H), 2.36 – 2.24 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.06 – 1.85 (m, 1H), 1.37 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。 實施例 4 ，對甲苯磺酸鹽之結晶 2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }-N-[(3S,5S)-5- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺，對甲苯磺酸鹽 (4 ，對甲苯磺酸鹽 )
Figure 02_image051
以水及乙醇(9：1，300 mL)的混合物對實施例4，對甲苯磺酸鹽(19.1g，31.3 mmol)處理，之後用熱風槍進行最小回溫，直到獲得溶液。使此冷卻至室溫過夜，然後攪拌額外24小時，隨之藉由添加乙醇(35 mL)將溶劑比調整至大約4：1水/乙醇。將所得混合物加熱至85℃以給予溶液，將其在3小時期間冷卻至室溫，然後在室溫下攪拌過夜。藉由過濾收集沉澱物，給予固體，將其在配備有氮排放的真空烘箱中乾燥，並預熱至40℃。獲得呈白色粉末之2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺，對甲苯磺酸鹽。產量：11.8 g，19.3 mmol，62%。LCMSm/z 439.2 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.39 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 9.27 (s, 2H), 9.13 (br s, 2H), 8.99 (br d,J = 7.6 Hz, 1H), 8.65 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 (dd,J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.68 (dd,J = 4.8, 1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd,J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.49 (br d,J = 8.0 Hz, 2H), 7.18 (dd,J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 7.11 (br d,J = 8.0 Hz, 2H), 5.24 (br d,J HF = 45.1 Hz, 1H), 4.52 – 4.38 (m, 1H), 4.18 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.59 – 3.47 (m, 1H), 3.44 – 3.18 (m, 2H), 2.92 (dd,J = 11.9, 11.8 Hz, 1H), 2.37 – 2.22 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.08 – 1.84 (m, 1H), 1.37 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。
將大多數此材料(11.6g)與2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺，對甲苯磺酸鹽(7.4 g)的另一樣品合併；藉由粉末x射線繞射分析，個別樣品已展現相同的繞射圖案。二樣品之混合物提供蓬鬆的白色固體(19.0 g)。
粉末x射線繞射分析是使用配備有Cu輻射源(K-α平均值)的Bruker AXS D8 Endeavor繞射儀對此實施例的固體進行。發散狹縫設置在15mm連續照明下。藉由PSD-Lynx Eye偵測器偵測到繞射輻射，偵測器PSD的開口設置為3.00度。X射線管電壓和安培分別設定為40 kV和40 mA。使用0.01度的步長和1.0秒的步進時間，在Cu波長為3.0至40.0度2-θ下，在θ-θ測角器中收集數據。抗散射螢幕設置為1.5 mm的固定距離。在收集期間，樣品以15/min旋轉。藉由將樣品放置在矽低背景樣品架中來製備樣品，並在收集期間旋轉樣品。
使用Bruker DIFFRAC Plus軟體收集數據，並藉由EVA diffract plus軟體進行分析。峰搜索之前未處理PXRD數據檔案。使用EVA軟體中的峰搜索演算法，以閾值為1所選的峰用於進行初步峰分配。為確保有效性，手動進行調整；目測檢查自動分配的輸出，並調整峰位置以到最大峰。一般選擇具相對強度≥ 3%的峰。未選擇未解析或與噪聲一致的峰。在USP中記載來自PXRD的峰位置相關的典型誤差達± 0.2° 2θ (USP-941)。相對峰高度的一些變化是基於晶體尺寸和形態的變化而預期。圖3提供特徵性x射線粉末繞射圖案。來自此圖的PXRD數據在下面進一步描述。
Figure 02_image053
Figure 02_image055
實施例 4 ，對甲苯磺酸鹽之替代合成 2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 S,5 S)-5- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺，對甲苯磺酸鹽 (4 ，對甲苯磺酸鹽 )
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Figure 02_image059
在10分鐘期間(內部反應溫度76℃)，將C14 (9.47 g，17.6 mmol)、對甲苯磺酸單水合物(98%，3.58 g，18.4 mmol)、及水 (4.74 mL，263 mmol)於乙腈(90.0 mL)中之溶液加熱至90℃。12小時之後，將反應混合物在10分鐘期間冷卻至25℃，並在25℃下保持過夜。然後冷卻到10℃，並過濾。濾餅用已冷卻到10℃之1體積的95：5乙腈/水混合物沖洗二次，給予呈黃色固體之2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺，對甲苯磺酸鹽。產量：8.30 g，13.6 mmol，77%。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.40 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 9.27 (s, 2H), 9.17 - 9.07 (br s, 2H), 8.97 (br d,J = 7.6 Hz, 1H), 8.65 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.37 (dd,J = 2.7, 1.7 Hz, 1H), 7.68 (dd,J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd,J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.47 (br d,J = 8.0 Hz, 2H), 7.18 (dd,J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 7.11 (br d,J = 7.9 Hz, 2H), 5.24 (br d,J HF = 45.1 Hz, 1H), 4.52 - 4.38 (m, 1H), 4.18 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.59 - 3.47 (m, 1H), 3.44 - 3.19 (m, 2H), 2.90 (dd,J = 11.8, 11.8 Hz, 1H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.06 - 1.84 (m, 1H), 1.37 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。 實施例 4 ，對甲苯磺酸鹽 之單晶體 -X 射線結構測定 來自乙醇(3 mL)的實施例 4 ，對甲苯磺酸鹽 (10mg)的結晶，以甲苯和水(1：1)的緩慢擴散，給予適合X射線結構測定的晶體。單晶體 X- 射線分析
數據收集是在-100℃的Bruker D8 Venture繞射儀上進行。數據收集由omega和phi掃描所組成。
使用三斜空間群P1中的SHELX軟體套件，藉由固有定相(intrinsic phasing)來解析結構，每不對稱單元為二分子。隨後藉由全矩陣最小平方法(full-matrix least squares method)對結構進行細化。發現所有非氫原子，並使用異向性位移參數進行細化。
從傅立葉差圖中發現位於氮和氧上的氫原子，並在限制距離下細化。剩餘的氫原子被放置在所計算的位置，並允許其騎在其載子原子上。最終的細化包括對所有氫原子的均向性位移參數。 經確認之結晶的甲苯磺酸鹽。
由於乙醇在通道中的低佔有率且亦由於作為堆疊板觀察到的結晶稜柱形粒子的邊緣品質(參見PLM圖片)，細化具有挑戰性。基於藉由NMR實驗併入確認的乙醇，細化具有二個乙醇實體的分子模型，各實體佔有率為0.33。
使用PLATON (Spek 2010)進行使用似然法(Hooft 2008)的絕對結構分析。假設所提交的樣品是對映純(enantiopure)，結果顯示絕對結構已被正確分配。方法計算出正確結構正確分配的概率為100%。Hooft參數報告為0.075，Esd為(4)，而Parson氏參數報告為0.087，Esd為(5)。
對於每不對稱單元的兩個相同分子，在C18_C21 / C40_C43處的目標絕對構形確認為(-S)_(-S)/  (-S)_(-S)。
表D1總結了相關晶體、數據收集和細化資訊。原子坐標、鍵長、鍵角及位移參數列在表D2 - D4中。
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表D1. 對實施例 4 ，對甲苯磺酸鹽 之晶體數據及結構細化。
實驗式 C29.67 H33 F N6 O6.33 S
式重量 626.00
溫度 296(2) K
波長 1.54178 Å
晶體系統 三斜
空間群 P1
單位晶胞尺寸 a = 6.9545(4) Å α= 83.178(2)°。
   b = 10.1175(6) Å β= 83.176(2)°。
   c = 24.8467(15) Å γ = 70.487(2)°。
體積 1630.33(17) Å3
Z 2
密度(計算值) 1.275 Mg/m3
吸收係數 1.364 mm-1
F(000) 657.3
晶體尺寸 0.340 x 0.260 x 0.180 mm3
數據收集的θ範圍 6.778至72.343°。
指數範圍 -8＜=h＜=8, -10＜=k＜=12, -30＜=l＜=30
所收集的反射 29135
獨立反射 10147 [R(int) = 0.0194]
到θ=67.679°的完全性 94.3 %
吸收校正 實驗
細化法 對F2之全矩陣最小平方
數據/約束/參數 10147 / 13 / 855
對F2 之適合度 (Goodness-of-fit) 1.060
最終R指數[I＞2Σ(I)] R1 = 0.0417, wR2 = 0.1220
R指數(所有數據) R1 = 0.0424, wR2 = 0.1232
絕對結構參數 0.073(4)
消光係數 n/a
最大差異峰及洞 0.362及-0.298 e.Å-3
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實施例 5 2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 R,4 R)-4- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺 (5 )
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步驟 1. 苄基 (3 R,4 R)-3-[( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ]-4- 氟哌啶 -1- 羧酸酯 (C15 ) 之合成。
將苄基氯甲酸酯(258 mg，1.51 mmol)添加到三級丁基[(3R ,4R )-4-氟哌啶-3-基]胺甲酸酯 (300 mg，1.37 mmol)於四氫呋喃 (15 mL)及碳酸鈉水溶液(1 M；2.75 mL，2.75 mmol)之0℃混合物。在15℃下攪拌反應混合物16小時之後，添加水(20 mL)，並以乙酸乙酯(2 x 30 mL)萃取所得混合物。將合併的有機層以飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌，以硫酸鈉乾燥，過濾，並真空濃縮以提供呈白色固體之C15 。產量：485 mg，1.38 mmol，定量。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 7.43 – 7.28 (m, 5H), 5.14 (AB四重峰,J AB = 12.3 Hz, ΔνAB = 14.2 Hz, 2H；低磁場(downfield)雙峰擴大), 4.83 – 4.53 (m, 2H), 3.87 – 3.33 (m, 4H), 2.06 – 1.75 (m, 2H), 1.44 (s, 9H)。步驟 2. 苄基 (3 R,4 R)-3- 胺基 -4- 氟哌啶 -1- 羧酸酯，鹽酸鹽 (C16 ) 之合成。
以氯化氫(於乙酸乙酯之溶液；12 mL)處理C15 (485 mg，1.38 mmol)於甲醇(6 mL)中之溶液。將反應混合物在20℃下攪拌1小時之後，真空濃縮，給予呈白色固體之C16 。產量：370 mg，1.28 mmol，93%。1 H NMR (400 MHz, 氧化氘) δ 7.50 – 7.39 (m, 5H), 5.17 (s, 2H), 4.93 – 4.71 (m, 1H, 假設值；被溶劑峰部分遮蓋), 4.42 – 4.27 (m, 1H), 4.24 – 3.98 (m, 1H), 3.51 – 3.39 (m, 1H), 3.21 – 2.99 (m, 2H), 2.29 – 2.16 (m, 1H), 1.86 – 1.71 (m, 1H)。步驟 3. 苄基 (3 R,4 R)-3-{[(2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 } 嘧啶 -5- 基 ) 羰基 ] 胺基 }-4- 氟哌啶 -1- 羧酸酯 (C17 ) 之合成。
對P1 (170 mg，0.502 mmol)、C16 (145 mg，0.502 mmol)、及N,N -二異丙基乙基胺(0.263 mL，1.51 mmol)於N,N -二甲基甲醯胺(8 mL)中之混合物添加O -(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’ -四甲基脲鎓六氟磷酸酯(HATU；287 mg，0.755 mmol)。在18℃攪拌反應混合物2小時，隨之與使用C16 (42.7 mg，0.148 mmol及171 mg，0.592 mmol)進行的二個類似反應合併，以水(50 mL)稀釋，並乙酸乙酯 (30 mL)萃取。有機層以飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌，以硫酸鈉乾燥，過濾，且於減壓下濃縮。經矽膠層析法 (梯度：在石油醚中之0%至100%乙酸乙酯)，獲得呈黃色固體之C17 。合併產量：540 mg，0.943 mmol，76%。LCMSm/z 573.1 [M+H]+ 。步驟 4. 2-{5-[(3- 乙氧基吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 R,4 R)-4- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺 (5 ) 之合成。
將C17 (300 mg，0.524 mmol)及10%碳上鈀(300 mg)於乙醇 (20 mL)中之混合物在氫氣球下於15℃攪拌2小時。反應混合物與使用C17 (200 mg，0.349 mmol及40 mg，70 µmol)進行的二個類似反應合併之後，藉由矽藻土墊過濾。濃縮濾液，並使用逆相HPLC純化殘質(管柱：Agela Durashell C18，5 µm；移動相A：於水中之0.05%氫氧化銨；移動相B：乙腈；梯度：30%至50% B)，給予呈白色固體之2-{5-[(3-乙氧基吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3R ,4R )-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺。合併產量：174 mg，0.397 mmol，42%。LCMSm/z 439.2 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 9.52 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 9.20 (s, 2H), 8.65 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 8.56 (dd,J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.71 (dd,J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 7.28 – 7.23 (m, 1H, 假設值；被溶劑峰部分遮蓋), 7.17 (br d,J = 8 Hz, 1H), 7.02 (dd,J = 7.9, 4.9 Hz, 1H), 4.86 – 4.66 (m, 1H), 4.37 – 4.26 (m, 1H), 4.18 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.36 (ddd,J = 12.3, 3.4, 3.4 Hz, 1H), 3.09 – 2.99 (m, 1H), 2.86 – 2.75 (m, 2H), 2.11 – 1.81 (m, 2H), 1.50 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。 實施例 6 2-{5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 R,4 R)-4- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺 (6 )
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步驟 1. 苄基 (3 R,4 R)-3-{[(2-{5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 } 嘧啶 -5- 基 ) 羰基 ] 胺基 }-4- 氟哌啶 -1- 羧酸酯 (C18 ) 之合成。
對P2 (50 mg，0.14 mmol)、C16 (40.5 mg，0.140 mmol)、及N,N -二異丙基乙基胺 (73.3 µL，0.421 mmol)於N,N -二甲基甲醯胺 (2 mL)中的混合物添加O -(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’ -四甲基脲鎓六氟磷酸酯(HATU；80 mg，0.21 mmol)。在反應混合物在18℃下攪拌2小時之後，與使用C16 (24.3 mg，84.2 µmol)進行的類似反應合併，然後以水(20 mL)淬滅並以乙酸乙酯(20 mL)萃取。有機層為以飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌，以硫酸鈉乾燥，過濾，並以真空濃縮。通過製備型薄層層析法(洗提液：乙酸乙酯)之殘質純化給予呈黃色固體之C18 。合併產量：90 mg，0.152 mmol，68%。LCMSm/z 591.1 [M+H]+ 。步驟 2. 2-{5-[(3- 乙氧基 -5- 氟吡啶 -2- 基 ) 氧基 ] 吡啶 -3- 基 }- N-[(3 R,4 R)-4- 氟哌啶 -3- 基 ] 嘧啶 -5- 甲醯胺 (6 ) 之合成。
將C18 (70 mg，0.12 mmol)及10%碳上鈀(100 mg)於乙醇 (20 mL)中之混合物在氫氣球下於15℃攪拌2小時，隨之與使用C18 (20 mg，34 µmol)進行的類似反應合併並藉由矽藻土墊過濾。將濾液真空濃縮之後，使用逆相HPLC (管柱：Agela Durashell C18，5 µm；移動相A：於水中之0.05%氫氧化銨；移動相B：乙腈；梯度：30%至50% B)純化殘質；此給予呈白色固體之2-{5-[(3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基]吡啶-3-基}-N -[(3R ,4R )-4-氟哌啶-3-基]嘧啶-5-甲醯胺。產量：14.2 mg，31.1 µmol，20%。LCMSm/z 457.1 [M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 9.52 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 9.20 (s, 2H), 8.63 (d,J = 2.7 Hz, 1H), 8.53 (dd,J = 2.7, 1.8 Hz, 1H), 7.58 (d,J = 2.6 Hz, 1H), 7.16 – 7.09 (br m, 1H), 7.06 (dd,J = 9.2, 2.6 Hz, 1H), 4.86 – 4.68 (m,J HF = 47.2 Hz, 1H), 4.37 – 4.27 (m, 1H), 4.16 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.36 (ddd,J = 12.2, 3.5, 3.4 Hz, 1H), 3.09 – 2.99 (m, 1H), 2.87 – 2.76 (m, 2H), 2.11 – 1.82 (m, 2H), 1.51 (t,J = 7.0 Hz, 3H)。 實施例 7 - 25
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1. 在此情況下，以三級丁氧基羰基基團保護哌啶側鏈試劑的氮。醯胺偶合反應之後，使用三氟乙酸將產物脫保護。 2. 在N,N -二異丙基乙基胺的存在下，苄基氯甲酸酯與三級丁基[6-(三氟甲基)哌啶-3-基]胺甲酸酯反應，提供苄基5-[(三級丁氧基 羰基)胺基]-2-(三氟甲基)哌啶-1-羧酸酯，其以三氟乙酸脫保護以給予必要的苄基 5-胺基-2-(三氟甲基)哌啶-1-羧酸酯作為立體異構物的混合物。 3. 在此情況下，醯胺偶合是由2-氯-1-甲基吡啶鎓碘化物(Mukaiyama試劑)和三乙胺媒介。 4. 使用逆相HPLC (管柱：Waters XBridge C18 OBD, 5 µm；移動相A：包含0.04%氫氧化銨及10 mM碳酸氫銨之水；移動相B：乙腈；梯度：23%至53% B)分離外消旋順式和反式產物。第一洗提異構物指定為實施例8，第二洗提異構物指定為實施例9。 5. 使用超臨界流體層析法將實施例9分離成其組分鏡像異構物。{管柱：Phenomenex Lux Amylose-1, 5 µm；移動相：7：3二氧化碳 / [包含0.2% (於甲醇中之7 M氨)之乙醇]}。第一洗提鏡像異構物指定為實施例10，而第二洗提鏡像異構物指定為實施例11。實施例10之滯留時間：6.48分鐘[管柱：Phenomenex Lux Amylose-1，4.6 x 250 mm，5 µm；移動相A：二氧化碳；移動相B：包含0.2%(於甲醇中之7 M氨)之乙醇；梯度：5%B經1.0分鐘，然後在8.0分鐘期間5%至60% B；流速：3.0 mL/分鐘；背壓：120巴]。實施例11之滯留時間：6.68分鐘(分析條件與實施例10所用者相同)。這二個化合物是彼此的鏡像異構物，但具未測定之相對和絕對立體化學。 6. 實施例13所用的哌啶側鏈為三級丁基(3S ,4S )-3-胺基-4-氟哌啶-1-羧酸酯；在醯胺偶合之後，使用三氟乙酸進行脫保護。 7. 三級丁基rac -(3R ,4R )-3-胺基-4-羥基哌啶-1-羧酸酯與苄基氯甲酸酯及碳酸鈉反應，接著將產物與1,1,1-參(乙醯基氧基)-1,1-二氫-1,2-苯并碘雜氧雜環戊烷(benziodoxol)-3-(1H )-酮(戴斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane))氧化，給予三級丁基3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}-4-側氧基哌啶-1-羧酸酯。使用三氟化(二乙基胺基) 硫對此材料進行二氟化，提供三級丁基3-{[(苄基氧基)羰基]胺基}-4,4-二氟哌啶-1-羧酸酯，其通過超臨界流體層析法[管柱：Chiral Technologies Chiralpak AD, 10 µm；移動相：85：15二氧化碳/(包含0.15%氫氧化銨之乙醇)]分離成其組分鏡像異構物。第一洗提鏡像異構物具有2.73分鐘之滯留時間(管柱：Chiral Technologies Chiralcel OJ-H, 4.6 x 250 mm, 5 µm；移動相A：二氧化碳；移動相B：包含0.05%二乙胺之乙醇；梯度：在5分鐘期間5%至40% B；流速：2.5 mL/分鐘)。在相同條件下，第二洗提鏡像異構物展現3.08分鐘之滯留時間。藉由在氫氧化鈀上氫化而使第一洗提鏡像異構物脫保護，以給予三級丁基3-胺基-4,4-二氟哌啶-1-羧酸酯之一鏡像異構物；此材料展現負(-)旋轉，並用於實施例15之合成。以相同的方式脫保護第二洗提鏡像異構物，以提供三級丁基3-胺基-4,4-二氟哌啶-1-羧酸酯的另一鏡像異構物，其展現正(+)旋轉，並用於實施例16之合成。 8.使用超臨界流體層析法[管柱：Chiral Technologies Chiralpak IC, 5 µm；移動相：3：2二氧化碳 / (包含0.1%氫氧化銨之乙醇)]將實施例17分離成其組分鏡像異構物。將第一洗提鏡像異構物指定為實施例18，並給出3.42分鐘之滯留時間([管柱：Chiral Technologies Chiralpak IC, 3 µm；移動相：3：2二氧化碳/(包含0.05%二乙胺之乙醇)；流速2.5 mL/分鐘]。將第二洗提鏡像異構物指定為實施例19，並給出4.42分鐘之滯留時間(分析條件與實施例@521所用者相同)。 9. 於實施例25所用的哌啶側鏈為三級丁基rac -(3R ,5S )-3-胺基-5-氟哌啶-1-羧酸酯；在醯胺偶合之後，以三氟乙酸進行脫保護。
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1.分析HPLC之條件。管柱：Waters Atlantis dC18, 4.6 x 50 mm, 5 µm；移動相A：水中之0.05%三氟乙酸(v/v)；移動相B：乙腈中之0.05%三氟乙酸(v/v)；梯度：5.0%至95% B，於4.0分鐘期間直線；流速：2 mL/分鐘。 2.分析HPLC之條件。管柱：Waters XBridge C18, 2.1 x 50 mm, 5 μm；移動相A：水中之0.0375%三氟乙酸；移動相B：乙腈中之0.01875%三氟乙酸；梯度：於0.6分鐘期間1%至5% B；於3.4分鐘期間5%至100% B；流速：0.8 mL/分鐘。 實施例 D1–D3
表3包括併入氘代乙基之三個預言實施例。這些化合物的製備將採以本領域通常知識上述描述的方法之變型。實施例D1 可以由中間體P3 和P4 製備，以類似於實施例4 中所述方式。實施例D2 和D3 可以分別通過用於實施例2 和1 的方法從氘化版的P2 製備。
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藥理數據
當然，發明所屬技術領域中具有通常知識者可以改變以下程序。人類 DGAT2(hDGAT2) 構築體的生成
以N末端FLAG標籤(具有 AspTyrLysAspAspAspAspLys的胺基酸序列的八肽)生成hDGAT2的構築體。對於經FLAG標籤的hDGAT2構築體，將hDGAT2的cDNA在Genscript中客製合成並藉由使用BamHI/XhoI限制酶選殖到pFastBac1載體(Invitrogen)以生成N末端經FLAG標籤之pFastBac1-FLAG-hDGAT2構築體(胺基酸1至388)。藉由雙向定序確認構築體。DGAT2 表現及 DGAT2 膜片段的製備
根據製造商的程序，使用Bac-to-Bac桿狀病毒表現系統(Invitrogen)在SF9昆蟲細胞中生成針對經FLAG標籤之hDGAT2的重組桿狀病毒。為了表現hDGAT2，在Sf900II培養基中生長的SF9細胞(20 L)在Wave Bioreactor System 20/50P波浪袋(wave bag)(GE Healthcare)中以感染複數為1感染hDGAT2桿狀病毒。感染40小時之後，然後藉由5,000 x g離心收集細胞。藉由再懸浮於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中洗滌細胞沉澱物，並藉由5,000 x g離心收集。將細胞糊狀物在液態N2 中快速冷凍，並在-80℃下儲存直至需要。除非另有註解，以下所有操作均在4℃下。將細胞以每1 g細胞糊狀物用3 mL緩衝液的比例再懸浮於裂解緩衝液(50 mM Tris-HCl，pH 8.0，250 mM蔗糖)(包括1 mM乙二胺四乙酸(EDTA)和完整的蛋白酶抑制劑雞尾酒(Roche Diagnostics))中。以杜恩斯均質機(dounce homogenizer)裂解細胞。藉由1,000 xg 離心20 min去除細胞碎片，並以100,000 xg 離心上清液1小時。在傾析掉液體之前，藉由以冰冷的PBS將超速離心管填充至頂部而將所得的沉澱物沖洗3次。以每1 g之原始細胞糊狀物用1 mL緩衝液的比例，將所洗滌的沉澱物在緩慢攪拌1小時下再懸浮於裂解緩衝液中(包含8 mM 3-[(3-膽醯胺丙基)二甲基銨基]-1-丙烷磺酸鹽(CHAPS))，並在100,000 x g再次離心1小時。將所得上清液等分，在液態N2 中快速冷凍，並於‒80℃儲存直至使用。活體外 DGAT2 檢定和 DGAT2 抑制劑的 IC50 值測定
為了測定IC50 值，在總體積為20 μL的384孔白色聚丙烯板(Nunc)中進行反應。對溶解於100%DMSO並在各孔的底部成點的1 μL的化合物中添加5 μL的0.04%牛血清白蛋白(BSA)(不含脂肪酸，Sigma Aldrich)，且將混合物在室溫下培育15分鐘。將hDGAT2膜部分在100 mm Hepes-NaOH，pH 7.4，含有200 nM二十碳四烯基氟膦酸甲酯(methyl arachidonyl fluorophosphonate)(Cayman Chemical；在氬氣下且乙酸乙酯母液乾燥且溶解在DMSO中成為5 mM儲備液)之20 mm MgCl2 中稀釋。將10 μL之此酵素操作溶液添加至盤中且在室溫下繼續培育2小時。DGAT2反應係藉由添加溶解在12.5%丙酮中的包含30 μM[1-14 C]癸醯基-CoA(由Perkin Elmer以客製合成，50 mCi/mmol)及125 μM 1,2-二癸醯基-sn -甘油(Avanti Polar Lipids)之4 μL之受質引發。將反應混合物在室溫下培育40分鐘且以添加5 μL之1% H3 PO4 停止反應。在添加45 μL MicroScint-E (Perkin-Elmer)之後，將盤以Top Seal-A覆蓋物(Perkin-Elmer)密封，且使用HT-91100微盤定軌振盪器(Big Bear Automation, Santa Clara, CA)達成受質與產物之相分配。在1450 Microbeta Wallac Trilux閃爍計數器(Perkin Elmer)中讀數之前，將盤在Allegra 6R離心機(Beckman Coulter)中以2,000 x g離心1分鐘，然後再以新製覆蓋物密封。DGAT2活性係藉由定量在上有機相中所生成之產物[14 C]十三醯基甘油來測量。
自所有反應減去使用用於完全抑制DGAT2之50 μM之((R )-1-(2-((S )-1-(4-氯-1H -吡唑-1-基)乙基)-3H -咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)哌啶-3-基)(吡咯啶-1-基)甲酮(WO 2013150416，實 例196-A)所獲得的背景活性。抑制劑係以11種不同的濃度測試以生成各化合物之IC50 值。所使用的11種抑制劑濃度典型包括50、15.8、5、1.58、0.50、0.16、0.05、0.016、0.005、0.0016和0.0005 μM。繪製數據為抑制百分比相對於抑制劑濃度且擬合方程式y = 100/[1 + (x /IC50 )z ]，其中IC50 為50%抑制的抑制劑濃度，且z為希爾斜率(Hill slope)(在其反曲點之曲線斜率)。
下表4依照上述檢定提供對DGAT2抑制的實施例之IC50 值。結果係以幾何平均IC50 值報告，並顯示重複次數(n)。
Figure 02_image143
其中，下表4A中顯示本文引用的WO2018033832的實施例：
Figure 02_image145
人類肝細胞中 DGAT2 抑制劑的 IC50 值測定
用於評估DGAT2抑制劑在基於細胞之設置中的功效，將冷凍保存之人類肝細胞(批號DOO, Celsis, Baltimore, MD)解凍且根據製造商指示平鋪在第I型膠原塗佈之盤上。在18小時隔夜回復期之後，將細胞以包含250 μg/mL Geltrex Basement Membrane Matrix (Thermo Fisher)的培養基覆蓋。在隔天，將培養基吸出且以包含400 μM十二烷酸(dodecanoate)鈉 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)及2 mM GlutaMAX (Thermo Fisher)之無血清Williams培養基E(Thermo Fisher)替換。在45分鐘之後，以完全抑制內源性DGAT1活性之最終濃度(3 μM)添加選擇性DGAT1抑制劑(實施例2，WO2009016462，經製備成在25% DMSO、75% PBS中的100X儲備液)至所有孔中。然後添加DGAT2抑制劑至所欲最終濃度。在15分鐘預培育之後，將0.2 μCi [14 C(U)]-甘油(Perkin Elmer)添加至各孔中，接著培育3小時。在此時移除培養基，且3000 rpm下離心10分鐘之前，將細胞在異丙醇：四氫呋喃(9：1)中通過軌道振盪裂解15分鐘。經放射標記之脂質使用溶劑系統藉由薄層層析術(溶劑係由己烷：二乙基醚：冰乙酸(75：23：2，v/v/v)所組成)解析。在分離之後，使用Typhoon 9500磷光成像(phosphorimaging)系統(GE)視覺化經放射標記之脂質。半最大抑制濃度(IC50 值)係使用GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA)藉由%抑制劑量反應曲線的非線性迴歸分析測定。
下表5提供根據上述檢定在人類肝細胞中抑制DGAT2的所選實施例的IC50 值。結果報告為幾何平均IC50 值，並顯示重複次數(n)。
Figure 02_image147
DGAT2 抑制劑對血漿和肝三酸甘油酯量的活體內功效
使用大鼠西方飲食模型來評估DGAT2抑制劑治療對活體內血漿三酸甘油酯產生和肝三酸甘油酯含量的功效。在標準實驗室條件下，將雄性史-道二氏大鼠養在12小時光照，12小時黑暗週期(06:00點燈)。研究開始前兩週，將動物置於高脂肪，高蔗糖，高膽固醇飲食(D12079b，由Research Diets, New Brunswick, NJ提供)。此飲食提供來自碳水化合物中~43%的卡路里，及來自脂肪中~41%的卡路里。實施例4 口服投予為於0.5%甲基纖維素在pH 7.0至7.5的去離子水中(甲基纖維素購自Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)之溶液(10 mL/kg給藥體積)。以媒劑處理的動物僅接受在去離子水中之0.5%甲基纖維素之pH 7.0至7.5水溶液。各治療以每天二次在08：00和16：00以3、10、30和100 mg/kg口服投予7天，每日總劑量為6、20、60和200 mg/kg/天。在第8天，在10：00，動物以媒劑或實施例4 給藥，並在給藥後2小時犧牲。藉由二氧化碳窒息犧牲大鼠並通過側尾靜脈採血。根據製造商指示(Roche Diagnostics Corporation, Indianapolis, IN)，使用Roche Hitachi Chemistry分析儀測定血漿TG量，並使用GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA)分析數據。肝臟在犧牲時收集用於測定肝三酸甘油酯，並將組織立即在液態氮中冷凍，且維持在–80℃直至分析。為了評估肝三酸甘油酯量，將包裹在鋁箔中的肝臟切片以錘子在液態氮浴中的鋁加熱塊上粉碎。肝組織粉碎產生均勻的粉末。在使用前，將均質緩衝液Tris  pH 7.4、98.9毫升0.9% NaCl及100微升之Triton X 100在攪拌板上混合10分鐘。稱量大約100毫克的均質肝組織的樣品重量，並將其置於具有1 mL之均質緩衝液的Lysing Matrix D tube (MP Biomedicals, Cat #6913-100)中。然後將所有樣品置於FastPrep FP120 (MP Biomedicals, Cat #6001-120)2分鐘或直到組織均質化。然後將所有樣品以10,000 g旋轉30秒，以清除來自均質化的泡沫。將50微升之樣品轉移到裝有450微升之Dulbecco氏磷酸鹽緩衝鹽水(DPBS)的無菌混合盤中，以創造1：10稀釋。再懸浮新樣品之後，所有樣品均轉移至用於Siemens Advia XPT Clinical Analyzer的採樣管中。通過吸光度進行三酸甘油酯檢定，並以每分升之毫克報告。然後在Microsoft excel中將每克組織中的三酸甘油酯標準化。如圖4 和5 所總結，在投予實施例4 的大鼠中，血漿(高達~70%)和肝臟(高達48%)三酸甘油酯有劑量依賴性降低。在循環三酸甘油酯反應的例子下，以實施例4 觀察到的所得量接近以食物餵養的媒劑動物的量。
圖4繪製對西方飲食餵養之史－道二氏大鼠中的血漿三酸甘油酯之實施例4的多劑量功效，其中血漿三酸甘油酯量是在實施例4之最後給藥之後2小時，從側尾靜脈抽取的血液測定。數據為8隻動物的平均值±標準偏差。相對於媒劑的組平均值之間差異藉由單因子ANOVA(1-way ANOVA)進行，接著為Dunnett氏的多重比較測試。相對於西方飲食媒劑動物，**** =p＜0.0001。
圖5繪製對西方飲食餵養之史－道二氏大鼠中的肝三酸甘油酯之實施例4的多劑量功效，其中肝三酸甘油酯量是在實施例4之最後給藥之後2小時，從側尾靜脈抽取的血液測定。數據為8隻動物的平均值±標準偏差。相對於西方飲食媒劑的組平均值之間差異藉由單因子ANOVA進行，接著為Dunnett氏的多重比較測試。相對於西方飲食媒劑動物，*=p＜0.05，*** = p＜0.001，****=p＜0.0001。pKa 之測定
例示的化合物被設計為DGAT2的基本抑制劑。所選的實施例的pKa由Analiza, Inc. (Cleveland, OH)根據Shalaeva, M., 等人，2008,J. Pharm. Sci ., 97, 2581-2606中描述的毛細管電泳法確定。下表6顯示針對實施例測定的最基本pKa，並表示為平均值，連同重複次數(n)。基本化合物與活體內更高的分佈量有關 (Obach, R. S., 等人，2009,Drug Metab. Dispos. ,36 , 1385-1405；Smith, D. A., 等人，2015,J. Med. Chem .,58 . 5691-5698)。
Figure 02_image149
人類肝細胞中內在清除率之測定 ( 中繼法 (Relay Method))
為了內在清除率(CLint )測量，使用了肝細胞中繼法(Di, L., 等人，2012,Drug Metab. Dispos. ,40 , 1860-1865及Di, L., 等人，2013,Drug Metab. Dispos. ,41 , 2018-2023)。使用冷凍保存的人類肝細胞(來自BioreclamationIVT的批號DCM)。解凍後，將肝細胞再懸浮在補充有Hepes和Na2 CO3 的Williams氏培養基E(訂製準則號碼91-5233EA；Gibco, Grand Island, NY)中。以錐蟲藍排除法對細胞計數，並以最終濃度為1 µM(二甲基亞碸，最終濃度0.025%；甲醇，最終濃度0.1125%)，最終培育體積為0.50 mL的測試化合物摻入包含0.5百萬個細胞/mL的24孔肝細胞盤。將盤在加濕培養箱中於37℃，具95%空氣/ 5% CO2 ，75%相對濕度下以150 rpm培育4小時。在0和4小時的時間，從培育中取出25 µL之肝細胞懸浮液，並添加到50 µL之冰冷的乙腈(包含美托洛爾(metoprolol)、吲哚美辛和特非那定(terfenadine)作為內標準品)中以淬滅反應。在室溫下將樣品以3000 rpm (1439 x g)離心(Eppendorf, Hauppauge, NY)10分鐘，且將50 µL之上清液轉移至乾淨盤中，完全乾燥，並在液態層析法/串聯質譜法(LC-MS/MS)分析前重新配製。將培養盤上剩餘的肝細胞懸浮液離心(3000 rpm，1439 x g，10分鐘，室溫)。將300 µL之上清液轉移至乾淨24孔盤中，並在-80℃下儲存直至下一次中繼實驗。對第二中繼實驗，將上清液盤先回溫至室溫30分鐘，然後回溫至37℃30分鐘，且將肝細胞添加樣品中，給出最終細胞密度為0.5百萬個細胞/mL。將盤在37℃培育4 h，取樣，並如上所述處理。進行5次中繼，給出總培育時間為20 h，採樣點在(0、4、8、12、16和20 h)。使用藉由LC-MS/MS分析在各時間點所測定的測試化合物的濃度以於計算內在清除率。
下表7顯示藉由上述方法所測定的所選之實施例的內在清除率。數據呈現為平均值+/-標準偏差，並顯示重複次數(n)。
Figure 02_image151
人類肝細胞之內在清除率之高通量測定
以384孔型態進行高通量人類肝細胞安定性檢定(Di, L., 等人，2012,Eur. J. Med. Chem. ,57 , 441-448)。從BioreclamationIVT (Baltimore, MD, Lot DCM)購買10個供體之合併冷凍保存的人類肝細胞。將冷凍保存的人類肝細胞融化，並再懸浮於補充HEPES和Na2 CO3 的Williams E培養基(WEM GIBCO，訂製準則# A28859EA)中。使用錐蟲藍排除法對細胞計數。使用Multidrop® 液體分配器(Multidrop DW, Thermo Scientific, Waltham, MA)以對384孔盤添加肝細胞懸浮液。蓋上細胞盤，並轉移至配備有二個6-位Mecour熱交換器的Sciclone® ALH 3000工作站(Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA)。將測試化合物以緩衝液在Sciclone® 上稀釋，並添加到肝細胞中。最終培育包含在15 µL總體積具有0.01% DMSO中之0.5百萬個細胞/mL和1 µM測試化合物。在37℃下進行培育。在各種時間點(0、3、10、30、60、120、240分鐘)，以包含內標準品 (實施例39A，WO1999/57125) 之冷乙腈淬滅反應。將樣品在4℃下以3000 rpm離心(Eppendorf, Hauppauge, NY)5分鐘。使用BioMek® FX液體處理器(Beckman Coulter, Inc. Danvers MA)將上清液轉移到有水加入的新盤，在LC-MS/MS分析之前將其密封。下表8顯示在上述高通量人類肝細胞檢定中測定的所選實施例的內在清除率。數據呈現為平均值+/-標準偏差，並顯示重複次數(n)。
Figure 02_image153
人類肝微粒體中內在清除率的測定
以384孔型態(Di, L., 等人，2012,Eur. J. Med. Chem. ,57 , 441-448)進行高通量人類微粒體安定性檢定。所有液體處理和培育與配備有一個3-位Mecour加熱平台位置的Biomek FX (Beckman Coulter, Inc., Indianapolis, IN)進行。從BD Biosciences (Bedford, MA)購買50個供體的合併人類肝臟微粒體(批次：HLM-103)。每次培育包含測試化合物(1 µM)、人類肝臟微粒體(0.25 µM CYP蛋白，相當於0.806 mg/mL蛋白質濃度)、NADPH 20.9 mM、MgCl2 (3.3 mM)和磷酸鉀緩衝液(pH 7.4時為100 mM)。最終反應體積為45 µL，包含0.1% DMSO。在37℃下進行培育。在各種時間點(例如，1、4、7、12、20、25、45和60分鐘)，添加具質譜法(MS)內標準品(實施例39A，WO1999/ 57125)之冷乙腈淬滅反應。將盤在4℃下以3000 rpm離心1 min (Sorvall RC 3C Plus, Thermo Scientific, Waltham, MA)。將盤密封並隨後使用LC-MS/MS分析。以相同方式製備對照盤，而不添加NADPH輔因子以監測任何非CYP/FMO催化的下降。下表9顯示如在上述人類肝臟微粒體檢定中所測定的所選實施例的內在清除率。數據呈現為平均值+/-標準偏差，並顯示重複次數(n)。
Figure 02_image155
各種培養基中的熱力學溶解度測定
活性醫藥成分的溶解度為在藥物開發過程中測定生物性能和調配容易性的重要特徵，較佳具有高溶解度(Klein, S. 2010,The AAPS Journal ,12 , 397-406；Di, L.，等人2012,Drug Disc. Today ,17 . 486-495)。如在表10中所示，在各種生物相關培養基中測量熱力學溶解度。將結晶固體的測試樣品(〜7 mg)在小瓶中與1 mL之相關緩衝溶液合併，並渦旋混合物來合併。如果固體完全溶解，則渦旋添加額外的固體，直至獲得飽和溶液。封蓋飽和溶液/固體混合物並經過以下溫度循環：1 min在25℃；8 h在40℃；5 h在15℃及12 h在25℃。以13,000 rpm，在離心過濾裝置(0.22 µm PVDF過濾器，MilliporeSigma，Milwaukee，WI)中過濾混合物，且參照三點標準曲線，藉由HPLC/UPLC測定濾液中測試化合物的濃度。磷酸鹽緩衝鹽水(PBS，pH 6.8，50 mM磷酸鹽緩衝液，250 mM NaCl)。模擬的胃液(SGN pH 1.2，USP配方)。空腹狀態模擬的腸液(FaSSIF，3 mM牛膽酸鈉，來自大豆卵磷脂之0.75 mM磷脂，50 mM磷酸鹽緩衝液，離子強度以NaCl，pH 6.8調整至250 mM)和進食狀態模擬的腸液(FeSSIF，15 mM牛膽酸鈉，來自大豆卵磷脂之3.75 mM磷脂，144 mM乙酸，50 mM磷酸鹽緩衝液，離子強度以NaCl，pH 6.8調整至250 mM)。
Figure 02_image157
在整個申請中，引用各種出版物。出於所有目的藉由引用方式將這些出版物的揭露整體併入本申請。
對於發明所屬技術領域中具有通常知識者而言將顯而易見的是，在不脫離本發明的範圍或精神的情況下，可以對本發明進行各種修改和變型。考慮到本文揭露的本發明之說明書和實踐，本發明的其他具體實施例對發明所屬技術領域中具有通常知識者將是顯而易見。說明書和實施例意於僅被認為是例示性，本發明的真實範圍和精神由所附的申請專利範圍指示。
[圖1]為顯示實施例4，型態1之特有的x射線粉末繞射圖案(垂直軸：強度(CPS)；水平軸：2θ(度))。
[圖2]為顯示實施例4，鹽酸鹽型態1之特有的x射線粉末繞射圖案(垂直軸：強度(CPS)；水平軸：2θ(度))。
[圖3]為顯示實施例4，對甲苯磺酸鹽，無水，型態1之特有的x射線粉末繞射圖案(垂直軸：強度(CPS)；水平軸：2θ(度))。
[圖4]繪製實施例4對在西方飲食餵養之史－道二氏大鼠中血漿三酸甘油酯的多劑量功效(垂直軸：血漿三酸甘油酯(mg/dL)，水平軸：西方飲食BID給藥(mg/kg))。
[圖5]繪製實施例4對在西方飲食餵養之史－道二氏大鼠中肝三酸甘油酯的多劑量功效(垂直軸：肝三酸甘油酯(µg/mg)，水平軸：西方飲食BID給藥(mg/kg))。
[圖6]為顯示製備P1，型態1之特有的x射線粉末繞射圖案(垂直軸：強度(CPS)；水平軸：2θ(度))。
[圖7]為顯示製備P1，型態2之特有的x射線粉末繞射圖案(垂直軸：強度(CPS)；水平軸：2θ(度))。
[圖8]為顯示製備P1，型態3之特有的x射線粉末繞射圖案(垂直軸：強度(CPS)；水平軸：2θ(度))。
Figure 109133632-A0101-11-0003-3

Claims (32)

  1. 一種式(I)之化合物
    Figure 03_image001
    其中， R1 為H或氟； R2 、R3 、R4 及R5 各獨立地選自H、及(C1 -C3 )氟烷基以及 R6 、R7 、R8 、及R9 各獨立地選自H、氟、及(C1 -C3 )氟烷基；以及 其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 、R8 、及R9 之一或二者非為H； 或其醫藥上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其中，R2 、R3 、R4 及R5 各獨立地選自H及(C1 )氟烷基且R6 、R7 、R8 、及R9 各獨立地選自H、(C1 )氟烷基、及氟；其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 、R8 、及R9 之一或二者非為H；或其醫藥上可接受之鹽。
  3. 如請求項1之化合物，其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、及R7 為H；而R8 及R9 獨立地選自H、(C1 )氟烷基及氟；其中，R8 、及R9 之至少一者為(C1 )氟烷基或氟；或其醫藥上可接受之鹽。
  4. 如請求項1之化合物，其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R8 、及R9 為H；而R6 及R7 各獨立地選自H、(C1 )氟烷基及氟，其中，R6 及R7 之至少一者為(C1 )氟烷基或氟；或其醫藥上可接受之鹽。
  5. 如請求項1之化合物，其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、及R9 為H；而R7 及R8 各獨立地選自H、(C1 )氟烷基及氟，其中，R7 及R8 之至少一者為(C1 )氟烷基或氟；或其醫藥上可接受之鹽。
  6. 如請求項1之化合物，其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R8 及R9 為H；而R7 為(C1 )氟烷基或氟；或其醫藥上可接受之鹽。
  7. 如請求項1之化合物，其中，R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R8 及R9 為H；及R7 為氟；或其醫藥上可接受之鹽。
  8. 一種化合物，係選自下列所組成之群組： 2-(5-((3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3R ,4S )-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺； 2-(5-((3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺； 2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3R ,4S )-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺； 2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3R ,4R )-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺； 2-(5-((3-乙氧基-5-氟吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3R ,4R )-4-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺；以及 2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺 或其醫藥上可接受之鹽。
  9. 一種化合物
    Figure 03_image003
    或其醫藥上可接受之鹽。
  10. 一種化合物2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N-((3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺。
  11. 一種化合物2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺鹽酸鹽。
  12. 一種化合物2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -((3S ,5S )-5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺甲苯磺酸酯。
  13. 一種化合物2-(5-((3-乙氧基吡啶-2-基)氧基)吡啶-3-基)-N -(5-氟哌啶-3-基)嘧啶-5-甲醯胺。
  14. 一種如請求項1至13之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽於製造治療脂肪肝、非酒精性脂肪肝疾病、非酒精性脂肪性肝炎、帶有肝纖維化之非酒精性脂肪性肝炎、帶有硬化之非酒精性脂肪性肝炎或帶有硬化及肝細胞癌之非酒精性脂肪性肝炎的藥劑之用途。
  15. 如請求項14中所主張之用途，其中，治療非酒精性脂肪性肝炎。
  16. 如請求項14中所主張之用途，其中，治療非酒精性脂肪肝疾病。
  17. 如請求項14中所主張之用途，其中，治療帶有肝纖維化之非酒精性脂肪性肝炎。
  18. 一種如請求項1至13中任一項之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽於製造自基線降低非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)活動性評分(NAS)的嚴重度至少一點的藥劑之用途。
  19. 一種如請求項1至13中任一項之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽於製造自基線降低非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)活動性評分(NAS)的嚴重度至少二點的藥劑之用途。
  20. 一種如請求項1至13中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽於製造治療高三酸甘油脂血症、動脈粥樣硬化、心肌梗塞、異常血脂症、冠狀動脈心臟疾病、高apo B脂蛋白血症、缺血型腦中風、第2型糖尿病、在患有第2型糖尿病之患者中的血糖控制、葡萄糖失耐症(IGT)之病症、受損之空腹血漿血糖(impaired fasting plasma glucose)的病症、代謝症候群、X症候群、高血糖症、高胰島素血症、胰島素抗性、葡萄糖代謝不良(impaired glucose metabolism)的藥劑之用途。
  21. 如請求項20之用途，其中，治療高三酸甘油脂血症。
  22. 一種醫藥組成物，包含治療有效量之如請求項1至13之化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑、媒劑或稀釋劑。
  23. 一種醫藥組合組成物，包含：治療有效量之組成物，包含： 第一化合物，該第一化合物為如請求項1至13之化合物、或該化合物之醫藥上可接受之鹽； 第二化合物，該第二化合物為抗糖尿病劑；非酒精性脂肪性肝炎治療劑、非酒精性脂肪肝疾病治療劑、膽固醇或脂質降低劑、或抗心臟衰竭治療劑以及 醫藥載劑、媒劑或稀釋劑。
  24. 如請求項23所主張之醫藥組合組成物，其中，該非酒精性脂肪性肝炎治療劑或非酒精性脂肪肝疾病治療劑為ACC抑制劑、KHK抑制劑、BCKDK 抑制劑、FXR促效劑、二甲雙胍(metformin)、腸促胰液素類似物、或GLP-1受體促效劑。
  25. 如請求項23所主張之醫藥組合組成物，其中，該非酒精性脂肪性肝炎治療劑或非酒精性脂肪肝疾病治療劑為4-(4-(1-異丙基-7-側氧基-1,4,6,7-四氫螺[吲唑-5,4’-哌啶]-1’-羰基)-6-甲氧基吡啶-2-基)苯甲酸；[(1R ,5S ,6R )-3-{2-[(2S )-2-甲基吖呾-1-基]-6-(三氟甲基)嘧啶-4-基}-3-氮雜雙環[3.1.0]己-6-基]乙酸；2-[(1R ,3R ,5S )-3-({5-環丙基-3-[2-(三氟甲氧基)苯基]-1,2-㗁唑-4-基}甲氧基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-基]-4-氟-1,3-苯并噻唑-6-羧酸；2-((4-((S )-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二㗁呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S )-氧呾-2-基)甲基)-1H -苯并[d]咪唑-6-羧酸；或2-[(4-{6-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-2-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸或其醫藥上可接受之鹽。
  26. 如請求項23所主張之醫藥組合組成物，其中，該抗糖尿病劑為SGLT-2抑制劑、BCKDK抑制劑、二甲雙胍(metformin)、腸促胰液素類似物、腸促胰液素受體調節劑、DPP-4抑制劑、或PPAR促效劑。
  27. 如請求項26所主張之醫藥組合組成物，其中，該抗糖尿病劑為二甲雙胍(metfomin)、西他列汀(sitagliptin)、埃格列淨(ertuglifozin)、2-[(4-{6-[(4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-2-基}哌啶-1-基)甲基]-1-[(2S )-氧呾-2-基甲基]-1H -苯并咪唑-6-羧酸或2-((4-((S )-2-(5-氯吡啶-2-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二㗁呃-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S )-氧呾-2-基)甲基)-1H -苯并[d]咪唑-6-羧酸。
  28. 如請求項23所主張之醫藥組合組成物，其中，該抗心臟衰竭劑或膽固醇或脂質降低劑為ACE抑制劑、血管收縮素受體阻斷劑、BCKDK 抑制劑、血管收縮素受體阻斷劑-腦啡肽酶(neprilysin)抑制劑、β腎上腺素受體阻斷劑、鈣通道阻斷劑、纖維酸酯、HMG CoA還原酶抑制劑或血管舒張劑。
  29. 一種晶體，包含具有下述結構的化合物：
    Figure 03_image005
    或其醫藥上可接受之鹽。
  30. 如請求項29之晶體，其中，該晶體包含該化合物之對甲苯磺酸鹽。
  31. 如請求項29之晶體，具有包含2-θ值為(CuKα輻射，波長為1.54056 Å) 7.2 ± 0.2、14.5 ± 0.2、15.8 ± 0.2、及27.7 ± 0.2之粉末x射線繞射圖案。
  32. 如請求項30之晶體，具有包含2-θ值為(CuKα輻射，波長為1.54056 Å) 3.8 ± 0.2、7.7 ± 0.2、8.8 ± 0.2、22.4 ± 0.2、及24.6 ± 0.2之粉末x射線繞射圖案。
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