CN101120937A - 绿原酸在制备具有预防和治疗宫颈癌功效的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
绿原酸在制备具有预防和治疗宫颈癌功效的药物中的应用,所说的绿原酸结构如式(I)所示。以所说的绿原酸为有效药物成分,与药学中可以接受的辅助性成分,或者是所说的绿原酸作为有效药物成分之一,与其它具有同类功效的药物成分共同作为复方形式的有效药物成分,和药学中可以接受的辅助性成分共同组成包括口服、注射等制剂形式的药物。
Description
技术领域
本发明涉及一种绿原酸的新药物用途,具体讲是绿原酸在制备具有预防和治疗宫颈癌功效的药物中的应用。
背景技术
子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,发病率在女性恶性肿瘤中居第二位,仅次于乳腺癌。目前研究已确认高危型人乳头瘤病毒(Humanpapillomavirus,HPV)是宫颈癌形成最重要的危险因子,在99.7%的浸润性官颈癌中可以检测到它的存在。HPV属小DNA、嗜上皮细胞性病毒。现已确认有超过200种HPV,其中大约有30种专门感染黏膜组织,根据它们所引起病损的临床预后,将这30余种HPV分为高危型和低危型。宫颈癌的形成是一个由低度鳞状上皮内病变到高度鳞状上皮内病变最后发展到浸润癌的连续复杂过程。
绿原酸(又称3-咖啡奎宁酸),结构如式(I)所示,为一种多酚类的化合物,目前已知其可具有升白、提高免疫力,抗诱变、抗菌、抗病毒、保肝等药理作用。如美国专利US 5,788,971阐述了绿原酸抗氧化作用对清除氧自由基,治疗炎症反应的作用。欧洲应用专利0/906/761表明了绿原酸的抗氧化性。日本专利JP 60243016公布了含3,5二咖啡酰奎宁酸的抗感染片剂。世界专利99/34812报道了由三羟基酮、连翘精醇和绿原酸组成的制剂具有的抗病毒、抗菌或免疫调节剂的功能。该组成在体外可引起衰竭细胞的活性和外周淋巴细胞α干扰素的产生。
San R.H.C.等在Mutation Res.(1987)117:229~239中报道了关于多酚类化合物绿原酸对黄曲霉素B1和苯并[α]芘致癌物质活性的抑制作用。
发明内容
在此基础上,本发明将明确提出一种绿原酸在制备具有预防和治疗宫颈癌功效的药物中的应用。
在本发明的绿原酸在制备具有预防和治疗宫颈癌功效的药物中的应用中,所说的绿原酸结构如式(I)所示。
在本发明的上述绿原酸药物应用中,除包括以所说的绿原酸单独作为有效药物成分,与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的包括口服或注射形式的药物制剂形式外,还包括以所说的绿原酸作为有效药物成分之一,与其它已有报道或使用的具有预防和治疗宫颈癌同类功效的药物成分共同作为复方形式的有效药物成分,如阿霉素、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、环磷酰胺等抗癌药物,以及利可君、昂丹司琼等抗癌辅助药物成分等,与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的包括口服和注射形式的药物制剂。
所说的药学中可以接受的辅助性成分,可包括例如在片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂或适当形式的缓控释剂等固体制剂形式口服药物制剂中可以接受和使用的填充剂(如淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纤维素、碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钙等)、黏合剂(如羟丙甲纤维素、聚维酮、淀粉浆、糊精浆、糖浆、胶浆、海藻酸钠、聚乙二醇、桃胶、阿拉伯胶等)、崩解剂(如交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素柠檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氢钠、碳酸钠等)、赋形剂、润滑剂(如硬脂酸镁(钠)、滑石粉、微粉硅胶、液体石蜡、聚乙二醇等)等;软胶囊剂中的基质(如植物油(色拉油、蓖麻油、氢化大豆油)、聚乙二醇(300、400、6000)等)、抗氧化剂(如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、半胱氨酸、叔丁基对羟基茴香醚、二丁甲苯酚、维生素E等);在口服缓控释制剂中的阻滞剂(如蜂蜡、巴西棕榈蜡、氢化植物油、硬脂醇、单硬脂酸甘油酯、醋酸纤维素酞酸酯、L-或S-丙烯酸树脂、羟丙甲纤维素酞酸酯、醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素、聚维酮、卡波普、海藻酸钠、脱乙酰壳聚糖、乙基纤维素、聚甲基丙烯酸酯、无毒聚氯乙烯、聚乙烯、乙烯-醋酸乙烯共聚物、硅橡胶等)、增稠剂(如明胶、聚维酮、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、右旋糖酐等);在液体口服制剂药物中常用的增溶剂、乳化剂、润湿剂、起泡或消泡剂等表面活性剂、稀释剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂、增稠剂等辅助成分,以及稳定剂(如环糊精包合物,表面活性剂等)、抗氧化剂(如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、半胱氨酸等);在注射药物制剂中允许使用的溶剂、助溶剂、稳定剂和附加剂等。经相应的制剂方法和过程,即可制备得到相应的口服或注射等制剂形式的药物。
通过下述绿原酸对人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤作用的实验可证实绿原酸在预防和治疗宫颈癌方面的显著功效。
实验材料
细胞系:细胞系Hela细胞株为人宫颈癌细胞,本实验室冻存。悬浮生长于RPMI-1640培养液中,内含10%小牛血清,1mmol/L谷胺酰胺及100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素。于37℃,5%CO2的饱和湿度孵箱中培养,每2~3天换液传代一次。
实验动物:雌性裸鼠(由四川大学实验动物中心提供),动物使用许可证号:第045号。
药物处理及试剂的配制:
绿原酸(四川九章生物化工科技发展有限公司提供,批号:040101,含量99.91%),用0.01mol/L PBS溶解配成原药贮存液2mg/ml,-20℃保存。临用时以RPMI-1640完全培养基稀释,过滤除菌。注射用环磷酰胺(简称Cy,白色粉末,200mg/安瓿装,5支/盒装,产品批号041102,山西泰盛制药公司产品,国药准字H14020373,批号0404/31),临用时以RPMI-1640完全培养基稀释,过滤除菌。PBS溶液储存液:NaCl8.5g、KCl 0.2g、Na2HPO4·12H2O 2.85g、KH2PO4 0.27g溶于100ml三蒸水,调pH值为7.4,高温高压消毒后4℃保存。临用时稀释10倍。
主要试剂与仪器:RPMI-1640培养基(美国GIBCO公司),青霉素、链霉素(华北制药有限公司),小牛血清(兰州中美合资民海生物),胰蛋白酶(美国GIBCO公司)。台盼蓝(美国Sigma公司)。超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司),二氧化碳培养箱(日本SANYO公司),倒置相差显微镜(德国Olympus公司),全自动酶联免疫检测仪(德国BIO-RAD,Model 1550),细胞培养板及血球计数板。
实验方法
细胞培养:Hela细胞常规复苏,传代。Hela细胞用含有10%小牛血清,100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI-1640培养基,在5%CO2、37℃的细胞培养箱内常规培养,0.1%胰蛋白酶消化传代,待细胞长至80%融合时进行实验。
体内试验:Hela细胞常规传代培养,收集对数生长期细胞,调整细胞浓度为1×107个/ml,按照2×106个/只(即0.2ml/只)于实验动物左前肢皮下接种,为种鼠。2周后,选择肿瘤生长旺盛且无溃破、健康情况良好的荷瘤种鼠,脱颈处死,在无菌条件下剥取肿瘤,剔除坏死组织后称重,按照1∶3的比例加入生理盐水用组织匀浆器研磨成单细胞悬液。随后将瘤细胞悬液接种于实验动物右前肢皮下,0.2ml/只。次日将实验动物随机分为绿原酸大剂量组、绿原酸中剂量组、绿原酸小剂量组、阳性对照组和阴性对照组。
给药方案:
口服组:每组10只,灌胃绿原酸大、中、小剂量组分别为:80mg/kg,40mg/kg、20mg/kg;阳性对照组为环磷酰胺6.0mg/kg;阴性对照组为生理盐水0.1ml/10g。每天一次,连续5天;
注射组:每组10只,尾静脉给药,绿原酸大、中、小剂量组分别为:40mg/kg、20mg/kg,5mg/kg;阳性对照组为环磷酰胺4.0mg/kg。每天给药1次,连续给药5天。
每2日记录体重1次并测量肿瘤大小。待阴性对照组瘤重约为1g时将动物处死,解剖分别取其肿瘤、肺、心、肝、肾等器官(组织)并称重。计算各器官的脏器系数,按下列公式计算肿瘤抑制率(抑瘤率),并进行组间t检验:
抑瘤率=(W阴性对照组平均瘤重-W给药组平均瘤重)/W阴性对照组平均瘤重×100%
实验结果如表1所示。
组别 | 动物数 | 瘤重(g) | 抑瘤率 |
阴性对照组 | 10 | 3.232±0.62 | 0 |
阳性对照组 | 10 | 1.894±0.27 | 41.38%** |
绿原酸大剂量组 | 10 | 2.069±0.37 | 35.96%** |
绿原酸中剂量组 | 10 | 2.192±0.54 | 32.15%** |
绿原酸小剂量组 | 10 | 2.373±0.56 | 26.56%** |
注:与阴性对照组比较 **P<0.01
组别 | 动物数 | 瘤重(g) | 抑瘤率 |
阴性对照组 | 10 | 2.972±0.74 | 0 |
阳性对照组 | 10 | 1.595±0.42 | 46.32%** |
绿原酸大剂量组 | 10 | 1.757±0.51 | 40.88%** |
绿原酸中剂量组 | 10 | 1.917±0.66 | 35.51%** |
绿原酸小剂量组 | 10 | 2.108±0.77 | 29.08%** |
注:与阴性对照组比较 **P<0.01
表1和表2的实验结果表明,绿原酸能具有良好的预防和抑制人宫颈癌细胞生长的效应和抗击引起宫颈癌的人乳头瘤病毒和相关细菌的攻击方面的作用。对比临床现有治疗方法,绿原酸用于治疗宫颈癌,不仅疗效显著,而且因为毒副作用极低,对机体综合改善良好,更有利于患者全身机能恢复,便于患者长期使用,而绿原酸在对宫颈癌的预防和治疗方面的功效和用途目前尚未见有文献报道。
以下通过实施例的具体实施方式再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下,根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更,均应包括在本发明的范围内。
具体实施方式
实施例1 绿原酸的0.9%氯化钠静脉注射液
处方一:
纯度大于95%的绿原酸 1g
枸橼酸 1.0g
枸橼酸钠 0.5g
氯化钠 18g
注射用水 2000ml
按注射剂的常规操作共制成2ml的注射剂1000支,每支含绿
原酸1毫克。
处方二:
纯度大于95%的绿原酸 3000g
氯化钠 4500g
注射用水 500,000ml
按注射剂的常规操作共制成500ml的注射剂1000瓶,每瓶含绿原酸3克。
处方三:
纯度大于95%的绿原酸 3000g
环磷酰胺 1000g
氯化钠 4500g
注射用水 500,000ml
按注射剂的常规操作共制成500ml的注射剂1000瓶,每瓶含绿原酸3克和环磷酰胺1克。
防止绿原酸水解的稳定剂:如环糊精包合物、表面活性剂(普鲁朗尼克)。抗氧化剂:亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、半胱氨酸。
生理可用的pH值调节剂:谷氨酸、L-天冬氨酸、抗坏血酸、盐酸、醋酸。
实施例2 含氯化钠的无菌粉针剂
处方一:
纯度大于95%的绿原酸无菌粉 1g
氯化钠无菌粉 18g
按无菌粉针剂的常规操作共制成2ml粉针剂1000支,每支含绿原酸1毫克。
处方二:
纯度大于95%的绿原酸无菌粉 3000g
按无菌粉针剂的常规操作共制成5ml粉针剂1000支,每支含绿原酸3克。
处方三~四:分别将实施例1中各处方的成分经冻干设备冷冻干燥制得绿原酸氯化钠的无菌冻干粉针剂。
实施例3 绿原酸的5%葡萄糖静脉注射用注射液
处方一:
绿原酸(纯度大于95%) 2g
枸橼酸 1.0g
枸橼酸钠 0.5g
葡萄糖 100g
注射用水 2000ml
按注射剂的常规操作共制成2ml的注射剂1000支,每支含绿原酸2毫克。
处方二:
绿原酸(纯度大于95%) 1500g
葡萄糖 1000g
注射用水 20,000ml
按注射剂的常规操作共制成20ml的注射剂1000支,每支含绿原酸1.5克。
处方三:
绿原酸(纯度大于95%) 3000g
葡萄糖 100g
注射用水 1000,000ml
按注射剂的常规操作共制成1000ml的注射剂1000瓶,每瓶含绿原酸3克。
防止绿原酸水解的稳定剂:如环糊精包合物、表面活性剂(普鲁朗尼克)。
抗氧化剂:亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、半胱氨酸。
生理可用的pH值调节剂:谷氨酸、L-天冬氨酸、抗坏血酸、盐酸、醋酸。
实施例4 绿原酸片剂
处方一:
绿原酸(纯度大于95%) 1.00g
填充剂 180.00g
崩解剂 10.00g
黏合剂 6.00g
润滑剂 3.00g
共计 200.00g
按片剂常规方法制备,共制成1000片,每片含绿原酸1mg。
处方二:
绿原酸(纯度大于95%) 100.00g
填充剂 170.00g
崩解剂 15.00g
黏合剂 10.00g
润滑剂 5.00g
共计 300.00g
按片剂常规方法制备,共制成1000片,每片含绿原酸100mg。
处方三:
绿原酸(纯度大于95%) 300.00g
填充剂 155.00g
崩解剂 20.00g
黏合剂 15.00g
润滑剂 10.00g
共计 500.00g
按片剂常规方法制备,共制成1000片,每片含绿原酸300mg。
处方四:
绿原酸(纯度大于95%) 300.00g
苯丁酸氮芥(纯度大于95%) 2.00g
填充剂 153.00g
崩解剂 20.00g
黏合剂 15.00g
润滑剂 10.00g
共计 500.00g
按片剂常规方法制备,共制成1000片,每片含绿原酸300mg、含苯丁酸氮芥2mg。
填充剂:如淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纤维素、碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钙。
黏合剂:如羟丙甲纤维素、聚维酮、淀粉浆、糊精浆、糖浆、胶浆、海藻酸钠、聚乙二醇、桃胶、阿拉伯胶。
崩解剂:如交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲淀粉钠、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素、柠檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氢钠、碳酸钠。
润滑剂:如硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、液体石蜡、聚乙二醇。
实施例5 绿原酸胶囊剂
处方一:
绿原酸(纯度大于95%) 1.00g
填充剂 184.00g
黏合剂 5.00g
润滑剂 10.00g
共计 200.00g
按胶囊剂常规方法制备,共制成1000粒胶囊,每粒胶囊含绿原酸1mg。
处方二:
绿原酸(纯度大于95%) 100.00g
填充剂 85.00g
黏合剂 5.00g
润滑剂 10.00g
共计 200.00g
按胶囊剂常规方法制备,共制成1000粒胶囊,每粒胶囊含绿原酸100mg。
处方三:
绿原酸(纯度大于95%) 300.00g
填充剂 85.00g
黏合剂 5.00g
润滑剂 10.00g
共计 400.00g
按胶囊剂常规方法制备,共制成1000粒囊,每粒胶囊含绿原酸300mg。
处方四:
绿原酸(纯度大于95%) 100.00g
5-氟尿嘧啶(纯度大于95%) 50.00g
填充剂 35.00g
黏合剂 5.00g
润滑剂 10.00g
共计 200.00g
按胶囊剂常规方法制备,共制成1000粒胶囊,每粒胶囊含绿原酸100mg,含5-氟尿嘧啶50mg。
填充剂:如淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纤维素、碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钙。
黏合剂:如羟丙甲纤维素、聚维酮、淀粉浆、糊精浆、糖浆、胶浆、海藻酸钠、聚乙二醇、桃胶、阿拉伯胶。
润滑剂:如硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、液体石蜡、聚乙二醇。
Claims (6)
2.如权利要求1所述的应用,其特征是以所说的绿原酸为有效药物成分,与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的口服药物制剂。
3.如权利要求1所述的应用,其特征是以所说的绿原酸为有效药物成分,与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的注射药物制剂。
4.如权利要求1所述的应用,其特征是以所说的绿原酸为有效药物成分之一,与其它具有预防和治疗宫颈癌同类功效的药物成分共同作为复方形式的有效药物成分,与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的口服药物制剂。
5.如权利要求4所述的应用,其特征是以所说的复方形式有效药物成分与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的口服药物制剂。
6.如权利要求1所述的应用,其特征是以所说的复方形式有效药物成分,与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的注射药物制剂。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Open date: 20080213 |