CN104887661A - 用于促进伤口愈合的医药组成物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明揭露一种用于促进伤口愈合的医药组成物及其用途，是以下列式I化合物作为其活性成分：借此，可发展出一种用于促进伤口愈合的医药组成物，特别是以上述式I化合物作为其活性成分，该医药组成物进一步包括一药学上可接受的稀释剂或载体，可将其制备为液体、膏状体、凝胶、敷料或喷雾等各种不同剂型，针对各种因外力因素所造成的开放性伤口，促进其伤口愈合。

Description

用于促进伤口愈合的医药组成物及其用途

技术领域

本发明是关于一种分离自牛樟芝的化合物，特别是关于一种将该化合物用于促进伤口愈合的医药组成物及其用途。

背景技术

人体的皮肤平均占总表面积约1.5～2.0平方公尺，功能上其可保持人体的温度及水分，避免受到细菌及外界环境的伤害。皮肤依构造可区分为表皮、真皮及皮下组织，各具有不同的功能。表皮是皮肤的最外层，覆盖全身，具有保护作用。表皮由外向内可再区分为角质层、透明层、颗粒层、棘皮层及基底层。真皮厚度约0.3～3毫米（mm），比表皮厚约七倍，含大量水分，所含水分占全身总水分的18～40％，可区分为乳头层与网状层。皮下组织位于皮肤的最下层，主要由脂肪组成，其厚度视年龄、性别以及健康状况而有所不同，主要功能是保温与防震。

当皮肤受到伤害便产生伤口，伤口发生至愈合的过程可分为三个阶段，分别是发炎期、增生期和成熟期。皮肤受伤后伤口就会发炎，这时吞噬细菌的白血球会聚集过来，吃掉坏死的组织、止血，并在伤口上分泌促进愈合的分泌物，这个时候伤口会产生红、肿、热的现象，发炎期通常持续三至四天，长者会维持到一周。随后，肉芽组织开始生长，薄薄的表皮细胞会长到伤口之内，白血球的活动量增加，胶原组织的合成现象开始作用，新的血管长出，伤口开始缩小，增生期通常维持十天至二周。最后，伤口会结疤，伤口外面被盖住且缩小，胶原纤维自行有规则地排列，多余的新血管开始退化、萎缩，成熟期通常从二周后至六个月，要等伤口完全愈合则需要二年的时间。

不论伤口是因创伤、烧伤、手术、急性或慢性伤口等所造成，伤口愈合一直是学术界及生医产业所长期关注的焦点。由于伤口的种类、大小，以及病人的营养状况、年纪、其他系统疾病、使用的药物等许多因素，都会影响伤口愈合的过程及时间，因此，如何发展出一种可有效促进伤口愈合的药物，甚或将其应用于人工皮肤、生医材料、敷料方面，更是亟待克服的议题。

发明内容

据此，本发明的一目的在提供一种用于促进伤口愈合的医药组成物，是以下列式I化合物作为其活性成分：

本发明的另一目的在提供一种医药组成物用于制备促进伤口愈合药物的用途，该医药组成物是以下列式I化合物作为其活性成分：

较佳地，上述的医药组成物及其用途中，该医药组成物进一步包括一药学上可接受的稀释剂或载体，该医药组成物是为液体、膏状体、凝胶、敷料或喷雾，该伤口是为开放性伤口。

经由本发明所揭露的技术手段，可发展出一种用于促进伤口愈合的医药组成物，特别是以上述式I化合物作为其活性成分，且可将其制备为液体、膏状体、凝胶、敷料或喷雾等各种不同剂型，针对各种因外力因素所造成的开放性伤口，促进其伤口愈合。

附图说明

图1-2显示动物伤口愈合试验的结果及伤口愈合情形。

图3是显示以切片分析伤口组织结构及恢复情形。

图4是显示以切片分析伤口处胶原蛋白合成的情形。

图5-6是显示伤口背面血管新生及血管分布的情形。

具体实施方式

牛樟芝成分的萃取

取牛樟芝（Antrodia camphorata）菌丝体、子实体或二者的混合物，利用习知萃取方式，以水或有机溶剂进行萃取，藉以取得牛樟芝水萃取物或有机溶剂萃取物。其中，有机溶剂可包括醇类（例如甲醇、乙醇或丙醇）、酯类（例如乙酸乙酯）、烷类（例如己烷）或卤烷（例如氯甲烷、氯乙烷），但并不以此为限。其中较佳者为醇类，更佳者为乙醇。经萃取过后的牛樟芝水萃取物或有机溶剂萃取物，可进一步通过高效液相层析加以分离纯化，再对分液进行纯化并以其中进行后续实验，在本发明中主要是针对其中4，7-二甲氧基-5甲基-1，3-苯并二氧环(4，7-dimethoxy-5-methyl-l，3-benzodioxole)进行探讨，以下简称SY-1，如式I所示：

关于4，7-二甲氧基-5甲基-1，3苯并二氧环(4，7-dimethoxy-5-methyl-l，3-benzodioxole)的萃取可参考Tu SH.,J Agric Food Chem.2012Apr11；60(14)：3612-8，在此不再赘述。在先前相关研究中，SY-1主要着重在研究其抗肿瘤的效果，并无任何与伤口愈合的相关研究被提出。而本发明是利用该化合物(以下简称SY-1)进行伤口愈合的相关实验，因此可算是一种极具新颖性的用途。

动物伤口愈合试验(非感染性创伤模式)

本实验动物购自国家实验动物中心的C57BL/6JNarl品系小鼠，体重40～45g，年龄为8周。饲养于国防医学院动物中心，动物房温度维持18～26度，相对湿度为30%～70%，光照周期12小时光照，12小时黑夜，并且提供充足饲料和饮水。手术前将小鼠以腹腔注射方式给予0.6g/kgAvertin。待小鼠麻醉后，将其背部毛发剃除。将纸卡固定于小鼠背部确定伤口位置，以麦克笔描绘出1.2x1.2cm2的面积。使用手术剪刀将此面积内的皮肤剪掉，形成伤口。使用棉花棒沾取适量药物后，将药物均匀涂抹在伤口上，以牛樟芝培养液(crude extract)、浓度10μg/ml及50μg/ml的Sy-1作为实验组。使用透气胶膜tegaderm覆盖伤口，以透气胶带将tegaderm固定，避免tergaderm脱落与伤口感染，每两天清理伤口予更换药物，并拍摄小鼠伤口的情况。另外同时以新霉素neomycin，多粘菌素Bpolymyxin B，枯草杆菌钛软膏bacitracin ointment等含不同抗生素作为正控制组(positive control)。以计算机软件分别定量不同天数的的伤口面积，利用t分布检验Student’s-test统计实验结果。

结果如图1及图2所示，与凡士林Vasel组别相较下，在处理药物的组别中，随着天数增加伤口有显着缩小的趋势，且伤口外观较完整，小鼠背部皮肤已长出毛发，在给予药物治疗的情形下，伤口约提前4-8天愈合。和空白培养组blankcontrol、凡士林培养组vasel control相比，浓度50μg/ml的组别在伤口愈合初期有明显作用(第0-8天特别显着)，而浓度10μg/ml的组别在伤口愈合晚期有较佳的作用(第8-18天特别显着)，此种不同浓度造成早期、晚期伤口愈合的相关机制仍有待后续研究加以探讨，但在本次实验中已确实可见到其明显的伤口愈合功效。若单独以整体伤口愈合的时效性来看，似乎给予浓度10μg/ml的组别具有较佳的伤口愈合时效性，除了初期即可快速愈合外，在第8天已可达到近90%的伤口愈合率。

而以牛樟芝培养液处理的组别，和blank control、vasel control相比似乎并无较佳的伤口愈合效果，但这是因牛樟芝培养液是以水溶液的形式进行，故导致伤口溃烂所致，后虽改以软膏剂型处理，但伤口愈合已延误，故此组别的数据仅供参考，仍有待后续进行相关实验以确认其真实效果。

伤口组织切片

1.组织冷冻包埋

（1）将适量非处方药OCT加入铝箔组织包埋盒内，把新鲜取下皮肤组织放入包埋盒内(组织刀口切面平行于包埋盒)，再加入OCT将整个组织覆盖，放在液态氮上快速冷冻(组织冷冻至四分之三即可拿起，避免组织龟裂)，至于-70℃保存。

2.组织冷冻切片

（1）在铝合金组织标本台上加入适量OCT，把预处理后组织块至于标本台上，将标本台放在切片机冷冻台上冷冻，把标本台放在切片机上并锁紧。（2）首先，以粗切模式(20μm)使组织块形成平面，再利用细切模式(5～7μm)开始切片。（3）将切出后卷曲薄片以水彩笔由上至下将之摊平。（4）将载玻片贴附于组织薄片，将玻片浸泡在丙酮，置于-20℃，30分钟。（5）将玻片放在-70℃保存。

3.苏木精&伊红Hematoxylin&Eosin染色

（1）将组织玻片浸泡在PBS，约3～4分钟。（2）将玻片染Hematoxylin，10分钟。（3）将玻片以Q-H₂O清洗三次后，再浸泡于Q-H2O，各5，5，5，10分钟。（4）将玻片染Eosin，15秒。（5）将玻片浸泡于95%，95%，100%，100%酒精，各1分钟。再浸泡于二甲苯xylene1分钟。（6）以70%酒精将玻片背面擦拭干净，等待样本干燥。（7）以盖玻片封片(封固剂munting medium:二甲苯xylene=2:1)。

结果如图3所示，其分别显示出正常(normal)、blank control、vasel control、牛樟芝培养液(crude extract)、浓度10μg/ml及50μg/ml的Sy-1、positive control等组别的伤口组织结构及恢复情况。由结果进一步分析组织型态变化，在小鼠创伤后21天，取伤口周围皮肤组织，以H&E染色法观察组织型态变化。由实验结果显示，在处理Blank和Vasel组别，其伤口组织表皮层明显尚未完全复原、毛囊未发育完全且无毛发生长。相较之下，在处理药物组别，其伤口组织表皮层已完全复原、真皮层结构与正常小鼠较为相似，且有毛囊发育。其中，在处理SY-1组别，皮肤结构最完整、组织层次分明、毛囊发育明显且有毛发生长。由以上结果显示，在给予药物治疗下(浓度10μg/ml及50μg/ml的Sy-1处理的组别)，显着促进小鼠伤口愈合。

胶原蛋白合成

将小鼠牺牲后，以上述方式进行组织切片、染色，以分析伤口处胶原蛋白合成的情形。结果如图4所示，在小鼠创伤第21天，取伤口周围皮肤组织，以马松三色Masson’s trichrom染色法观察皮肤组织内胶原蛋白合成的情形。由实验结果显示胶原蛋白被染成蓝色，与正常小鼠比较下，在Blank和Vasel组别中，组织内部胶原蛋白合成数量少且结构松散；而在处理药物组别中，组织内部胶原蛋白合成数量和结构紧密程度都与正常小鼠相似。由以上结果显示，在给予药物治疗下，具有促进胶原蛋白合成的作用。

血管新生

将小鼠牺牲后，以拍照记录分析伤口背面血管分布情形，观察其血管新生的结果。结果如图5-6所示，在小鼠创伤第21天，取伤口周围皮肤组织，分析皮肤背面血管增生情形。实验结果显示，从皮肤外观可发现，相较于Blank和Vasel组别，在处理药物组别中，都具有显着促进血管面积、长度和分支发展的情形。从量化数据得知，在血管分布面积、长度、血管分支接头joint及途径path指针，处理药物组别均显着超越Blank和Vasel组别，显示SY-1具有显着的促进血管新生的作用，而血管新生为伤口愈合必要过程。

结论

由上述结果显示出，SY-1确实可促进C57BL6/J小鼠伤口愈合的效果，且高浓度的SY-1(50ug/mL)在伤口愈合初期、低浓度的SY-1(10ug/mL)在伤口愈合末期有明显作用。由组织切片染色结果显示以SY-1处理组别的组织完整性良好，且SY-1能明显促进胶原蛋白沈积及伤口血管新生，显示其促进愈合较佳。

发明人另有进行感染组的实验，但结果显示出SY-1不具杀菌效力，故在此未提供其相关实验数据。但就感染组与非感染组的结果来看，SY-1能明显促进C57BL6/J小鼠伤口愈合。不论感染或非感染组，高浓度的SY-1(50ug/mL)在伤口愈合初期，低浓度的SY-1(10ug/mL)在伤口愈合末期有明显作用。在非感染组SY-1能明显伤口血管增生。而感染组中牛樟培养液则因其伤口愈合未完成，血管增生效应明显。牛樟培养液因起初以水溶液进行，却导致伤口溃烂，后来改为软膏剂型，但伤口愈合已经延误，是以其数值仅列此供参考。感染组中，SY-1也能明显促进胶原蛋白沈积，显示其促进愈合较佳。苏木精&伊红染色法HEstaining是检验组织完整性，也具参考性。SY-1不具杀菌效力，其促伤口愈合效应，可能主要与其抗发炎作用有关，其作用机转仍有待后续实验进一步探讨。

通过上述结果，可提供一种用于促进伤口愈合的医药组成物，以及一种将该医药组成物用于制备促进伤口愈合药物的用途，该医药组成物是以下列式I化合物(即SY-1)作为其活性成分：

较佳地，上述的医药组成物或其用途中，该医药组成物进一步包括一药学上可接受的稀释剂或载体，该医药组成物是为液体、膏状体、凝胶、敷料或喷雾，该伤口是为开放性伤口。

通过上述结果，可发展出一种用于促进伤口愈合的医药组成物，是以SY-1作为其活性成分，且该医药组成物进一步包括一药学上可接受的稀释剂或载体，可将其制备为液体、膏状体、凝胶、敷料或喷雾等各种不同剂型，针对各种因外力因素所造成的开放性伤口，促进其伤口愈合。

本发明所提供的用于促进伤口愈合的医药组成物及其用途确具产业上的利用价值，惟以上的叙述仅为本发明的较佳实施例说明，凡精于此项技艺者当可依据上述的说明而作其它种种的改良，惟这些改变仍属于本发明的精神及以下所界定的专利范围中。

Claims (8)

1.一种用于促进伤口愈合的医药组成物，其特征在于，是以下列式I化合物作为其活性成分：

2.根据权利要求1所述的医药组成物，其特征在于，该医药组成物是为液体、膏状体、凝胶、敷料或喷雾。

3.根据权利要求1所述的医药组成物，其特征在于，该医药组成物进一步包括一药学上可接受的稀释剂或载体。

4.根据权利要求1所述的医药组成物，其特征在于，该伤口是为开放性伤口。

5.一种医药组成物用于制备促进伤口愈合药物的用途，其特征在于，该医药组成物是以下列式I化合物作为其活性成分：

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，该医药组成物是为液体、膏状体、凝胶、敷料或喷雾。

7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，该医药组成物进一步包括一药学上可接受的稀释剂或载体。

8.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，该伤口是为开放性伤口。